大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧小鼠腦組織保護(hù)作用

孫江兵，金 星，周 軍

（1.解放軍第23醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000；2.烏魯木齊市頭屯河區(qū)中心醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830023；3蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830002）

缺氧是指氧氣缺乏癥，即空氣中缺氧或氧氣缺乏狀態(tài)的總稱。大自然為每個(gè)人提供了基本生存條件，然而，如果處在一個(gè)缺少氧氣的特殊環(huán)境，或者雖然環(huán)境當(dāng)中不乏氧氣，但由于自身原因不能攝入足夠的氧，或者對(duì)吸入的氧氣不能充分利用，人體就會(huì)發(fā)生機(jī)能、代謝和形態(tài)上的變化。這種狀態(tài)總稱就是缺氧或低氧。與其它組織相比，大腦特別易于受到缺氧損傷［1，2］。近年來(lái)，人們對(duì)中藥抗缺氧藥理作用進(jìn)行了廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)許多復(fù)方、單味中藥及其提取成分具有抗缺氧作用，且作用效果持久穩(wěn)定、毒副作用小。野生的大花白麻國(guó)內(nèi)主要分布在新疆伊犁、庫(kù)爾勒、阿勒泰等地，是生長(zhǎng)在鹽堿、沙荒地區(qū)及戈壁灘上的多年生宿根植物資源，獨(dú)特的生長(zhǎng)環(huán)境使其具有十分特異的藥用保健功效。新疆大花羅布麻入藥已有千年歷史，其部分藥理作用很早就被人們發(fā)現(xiàn)并用于臨床，據(jù)《本草綱目》、《救荒本草》記載，其羅布麻葉有清熱利尿、平肝、安神等功效，臨床用于治療高血壓、冠心病、頸椎病、腎炎浮腫、神經(jīng)衰弱、更年期綜合征等疾?。?，4］，1977 年正式錄入《中華人民共和國(guó)藥典》。國(guó)家中藥現(xiàn)代化的提出為中藥、民族藥的發(fā)展，特別是像大花羅布麻這種在新疆有著廣泛資源且在民間大量使用的、功效確鑿的中藥進(jìn)行深層次的開(kāi)發(fā)研究提供了契機(jī)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，大花羅布麻葉營(yíng)養(yǎng)豐富，富含羽扇豆醇、金絲桃苷、三葉豆苷、多種氨基酸、多糖、維生素等成分，其中，黃酮類物質(zhì)為羅布麻葉主要的有效部位，近幾年研究表明大花羅布麻總黃酮具有抗氧化、抗衰老、抗血栓、抗腫瘤、降血脂、抗輻射促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶等作用［5］，提示其可能對(duì)缺氧導(dǎo)致的損傷具有一定的保護(hù)作用。但迄今關(guān)于大花羅布麻總黃酮對(duì)缺氧所致的腦損傷是否有保護(hù)作用及其機(jī)理研究尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)BALB／C小白鼠，雌、雄兼用，體重（20.0±2.0）g，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼養(yǎng)于蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院，以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)水，室溫18℃～25℃。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

ISP－21半自動(dòng)生化分析儀：荷蘭；BP210S電子天平：賽多利斯公司；UV－1800PC紫外分光光度計(jì)：上海精密儀器儀表有限公司；TGL－16G臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭儀器廠；YQ－3電動(dòng)勻漿機(jī)：江蘇金壇市醫(yī)療器械廠；高速低溫離心機(jī)，德國(guó)HERAEUS。

1.3 藥品與試劑

大花羅布麻葉總黃酮自制（HPLC測(cè)定其中槲皮素－3－O－槐糖苷和羅布麻甲素含量分別為4.66%和0.35%）；紅景天提取物（西安良萱生物工程有限公司，HPLC測(cè)定其中紅景天甙和肉桂醇苷含量分別為3%和5%）；以上兩種藥物實(shí)驗(yàn)前用N，N－二甲基甲酰胺溶解，吐溫－80助溶，生理鹽水稀釋至所需濃度 （N，N－二甲基甲酰胺：吐溫－80：生理鹽水＝1：1：8）；LDH、LD、SOD和 MDA試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.4 方法

1.4.1 大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧狀態(tài)下小鼠腦保護(hù)作用

［8］加以改進(jìn)：小鼠50只，雌、雄兼用，按體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組，缺氧模型組，缺氧＋高、低劑量（250mg／kg，100mg／kg）組和缺氧＋陽(yáng)性對(duì)照藥物紅景天提取物（250mg／kg）組，每組10只，給藥體積為0.4mL／20g。正常對(duì)照組和缺氧模型組給予同體積的蒸餾水，每天灌胃（ig）1次，共10d。于末次灌胃后1h，將所有小鼠置自制的減壓裝置內(nèi)，調(diào)整壓力漸減，在30min左右將裝置內(nèi)壓力減至0.04MPa（在壓力為0.02MPa和0.03MPa處各停留10min，以觀察所有小鼠活動(dòng)狀態(tài)，若無(wú)異常，將壓力升至0.03MPa，此時(shí)相當(dāng)于海拔5000m），在此壓力下維持6h，造成急性低氧模型，完成預(yù)定缺氧時(shí)間后將裝置內(nèi)壓力恢復(fù)至正常大氣壓，取出小鼠迅速摘眼球取血，之后斷頭處死取腦組織。其中半腦用于腦含水量的測(cè)定，另半腦及心臟稱重后按1：10（m／v）加入0～4℃的生理鹽水制成10%組織勻漿進(jìn)行相關(guān)生化指標(biāo)的測(cè)定。正常對(duì)照組置常氧室溫低氧裝置附近，與各缺氧組同時(shí)捕殺。

1.4.2 指標(biāo)檢測(cè)

用干濕質(zhì)量法測(cè)定腦含水量，各組取右半腦稱重，置50℃烘箱烘干至恒重。按公式計(jì)算含水量：腦含水量（%）＝［（濕重量－干重量）／濕重量］×100%。LDH、LD、SOD和MDA的測(cè)定均按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧小鼠腦組織含水量和乳酸含量的影響

由表1可見(jiàn)，用急性減壓法模擬高原缺氧引起小鼠腦含水量從常氧對(duì)照組的（77.25%±0.41%）明顯增加至（79.18%±0.47%，P＜0.01），而給予大花羅布麻葉總黃酮高劑量組小鼠腦含水量為（76.81%±0.45%），與缺氧模型組比較明顯降低（P＜0.01），與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。同時(shí)，模型組的大腦乳酸含量較正常對(duì)照組有顯著升高（P＜0.01），給予羅布麻葉總黃酮高劑量后，大腦乳酸含量下降了41.6%，且效果與陽(yáng)性對(duì)照組相當(dāng)。

2.2 大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧小鼠腦組織LDH活性的影響

由表2所示，與正常對(duì)照組相比，缺氧模型組的LDH活性升高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；而給予羅布麻葉總黃酮后有可降低LDH升高的趨勢(shì)，其中大花羅布麻葉總黃酮高劑量組與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P＜0.05），與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。

表1 大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧小鼠腦組織含水量和乳酸含量的影響

表2 大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧小鼠腦組織LDH活性的影響

2.3 大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧小鼠腦組織SOD活性的影響

由表3所示，與正常對(duì)照組相比，缺氧模型組的SOD活性顯著降低（P＜0.01）；而給予羅布麻葉總黃酮后小鼠腦組織中SOD活性明顯升高，其中大花羅布麻葉總黃酮高劑量組與模型組比較有顯著性差異 （P＜0.01），與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。

表3 大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧小鼠腦組織SOD活性的影響

2.4 大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧小鼠腦組織MDA含量的影響

由表4所示，與正常對(duì)照組相比，缺氧模型組的MDA含量顯著升高（P＜0.01）；而給予羅布麻葉總黃酮后小鼠腦組織中MDA含量明顯降低，其中大花羅布麻葉總黃酮高劑量組與模型組比較有顯著性差異（P＜0.01），與陽(yáng)性對(duì)照組相當(dāng)。

表4 大花羅布麻葉總黃酮對(duì)缺氧小鼠腦組織MDA含量的影響

3 討論

許多研究和文獻(xiàn)資料已經(jīng)證明，機(jī)體在缺氧狀態(tài)下的能量供應(yīng)主要來(lái)自糖酵解，而長(zhǎng)時(shí)間的缺氧會(huì)造成機(jī)體乳酸的大量堆積，導(dǎo)致代謝性酸中毒。同時(shí)人體在缺氧的狀態(tài)下還存在著不同程度的氧自由基代謝失衡，主要表現(xiàn)為具有清除超氧陰離子自由基的SOD活性下降，脂質(zhì)過(guò)氧化代謝產(chǎn)物 MDA增多等，這些都能影響機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和細(xì)胞的正常代謝。而羅布麻葉總黃酮在一定程度上可減輕缺氧引起的腦組織酸中毒癥狀和對(duì)抗缺氧引起的自由基對(duì)腦組織的損傷。主要表現(xiàn)在：①降低了缺血腦組織中乳酸含量和LDH的活性，并降低了大腦含水量，從而減輕了由于乳酸堆積造成的腦組織水腫；②可顯著降低缺血腦組織過(guò)氧化脂質(zhì)MDA含量和顯著升高超氧物歧化酶SOD的活性，以清除氧自由基對(duì)腦細(xì)胞損傷的作用。

通過(guò)以上研究，我們認(rèn)為大花羅布麻葉總黃酮能夠增強(qiáng)缺氧狀態(tài)下機(jī)體LDH活性，使乳酸生成減少或清除加快，減輕酸中毒對(duì)機(jī)體細(xì)胞造成的不良影響，同時(shí)可以對(duì)抗缺氧狀態(tài)下自由基對(duì)腦組織的損傷，維持腦組織的正常結(jié)構(gòu)功能。

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