固腎合劑含量測定方法的驗證

王淡娜，朱小帆，吳 烜，李順濃

（1.廣東眾生藥業股份有限公司 ，廣東 東莞 523325；2.廣東華南藥業集團有限公司，廣東 東莞 523325）

固腎合劑是遵循古代名醫張景岳“人到中年當大修”指導思想研制的保健治療藥，由補腎良藥左歸丸、五子衍宗丸和龜齡集（龜齡——取龜長壽之意）精選淫羊藿、人參、鹿茸、海馬、熟地黃、肉蓯蓉、鎖陽等組成。本品溫腎助陽，固腎滋陰，適用于腎虛所致的精神不振，腰背酸痛，脛酸膝軟，畏寒肢冷，夜尿增多。本研究根據藥品生產質量管理的有關規定，參照藥品標準分析方法驗證指導原則［1］，對“中藥中的偉哥”［2］——淫羊藿中淫羊藿苷含量的測定做了方法學驗證。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UltiMate－3000液相色譜儀（德國戴安）；800離心機（常州國華電器有限公司）；AUW120D電子天平（日本島津）。

1.2 試藥

甲醇（色譜純）、乙醇為分析純；純化水；淫羊藿苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供；固腎合劑由廣東華南藥業集團有限公司生產提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為C18（SMA，4.6mm×250mm，5μm）。流動相為：甲醇－水（65∶35），流速1mL／min，檢測波長為270nm，理論板數按淫羊藿苷計算不低于6000［3］。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷對照品13.44mg，置20mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成672μg／mL的溶液；精密吸取0.5 mL、1mL、3mL、5m、7mL分別置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖 勻，制 成 每 1mL 中 含 33.6μg、67.2μg、210.6μg、336μg、470.4μg和原有的672μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品的制備

取樣品適量，搖勻，精密量取10mL，置25mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得。

2.2.3 陰性供試品溶液的制備

取處方中除去淫羊藿的藥材制成的樣品，按供試品溶液的制備即得。

2.3 色譜圖的測繪及陰性干擾試驗

分別精密量取上述對照品溶液（33.6μg／mL）、供試品溶液和陰性供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，色譜見圖1、圖2、圖3。在對照品色譜峰相應位置，供試品溶液具有相同保留時間的色譜峰，陰性供試品溶液在對照品溶液相同保留時間處無吸收峰，證明陰性供試品對本含量測定無影響。

圖1 淫羊藿苷對照品色譜

圖2 淫羊藿陰性色譜

圖3 固腎合劑供試品色譜

2.4 線性關系考察

取精密吸取淫羊藿苷對照品溶液20μL，依次進樣分析，計錄色譜圖，以進樣濃樣為自變量（X），淫羊藿苷峰面積為因變量（Y）進行最小二乘法線性回歸方程。得回歸方程：Y ＝300387.31X＋976.63，r＝0.9996。結果表明，淫羊藿苷濃度在33.6～672μg／mL范圍內線性關系良好。

2.5 精密度考察

用同一對照品溶液，連續進樣6次測定，峰面積的RSD為0.2%。結果表明精密度良好。

2.6 重復性試驗

按擬定的含量測定法對同一個樣品測定5次，測定結果為：3.69mg／支 、3.73mg／支、3.76mg／支、3.73mg／支、3.68mg／支，RSD為0.89%。結果表明重現性良好。

2.7 穩定性試驗

取供試品溶液，分別于0、2、4、6h進樣測定，峰面積的RSD為0.35%，表明供試品溶液在6h內測定結果穩定。

2.8 回收率試驗

精密吸取3.72mg／支供試品10mL，置25mL量瓶中，精密加入淫羊藿苷對照品約4mg，加乙醇至刻度，振搖，離心，取上清液，依次進樣分析計算，結果回收率的平均值為97.2%，RSD為1.6%。詳見表1。

表1 回收試驗結果

2.9 樣品測定結果

取供試品照“2.2.2”制備，進樣分析計算，結果分別為3.72mg／支、3.63mg／支、4.47mg／支、5.36mg／支和4.21mg／支。含量指標（不得少于1.0mg／支）符合規定。

3 討論

固腎合劑按法定標準的處方工藝生產，按GMP要求控制質量，質量指標有外觀性狀、專屬的薄層鑒別、裝差異、微生物檢查和含量測定。含量測定采用了現代科學儀器和高新技術液相色譜法，方法學考察淫羊藿苷濃度與峰面積呈線性關系，精密度、穩定性、回收率均符合要求，陰性試驗無干擾，證明本法準確可靠，可作為含量測定控制產品質量。

淫羊藿苷是淫羊藿藥材中主要的有效成分，具有雄性激素樣作用［4］。據說嘉慶皇帝服了龜齡集，身體強健，連續生了九個兒子［5］。乾隆皇帝活至89歲，望之如60許人，精神矍鑠，健康長壽的秘訣之一是常服龜齡集［6］。固腎合劑與龜齡集的組成、功效類同，如果您不了解固腎合劑，懂得龜齡集就明白固腎合劑。固腎合劑的處方含淫羊藿、鹿茸、海馬、人參、巴戟天、五味子、肉蓯蓉、補骨脂、鎖陽等，都是傳統經典的補益藥，制成口服液服用方便，是腎虛及中老年的保健治療良藥。

［1］國家藥典委員會.中國藥典［M］.二部附錄.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

［2］王惟恒，胡順強，強剛.家庭中醫藥1000問［M］.合肥：安徽科學技術出版社，2006：132.

［3］張虹，湯金城.208種中藥功效及新用［M］.鄭州：中原農民出版社，2009：350.

［4］常宇，李曼荻.中醫是本故事書［M］.北京：化學工業出版社，2009：286.

［5］楊曉光，趙春媛.中醫中藥軼事珍聞［M］.北京：人民軍醫岀版社，2007：66.