HPLC法同時測定藿香正氣水中五種標志成分

何祥偉

（瑞昌市中醫(yī)院，江西 瑞昌 332200）

藿香正氣水是夏季常用解暑藥物，主要由藿香、蒼術(shù)、陳皮、厚樸、白芷、茯苓、大腹皮、半夏、甘草、紫蘇等中藥組成，具有散寒化濕、和中祛暑的作用，常用來治療脘腹脹痛、嘔吐腹瀉以及胃腸型感冒［1］。厚樸、白芷和甘草是藿香正氣水中重要的組成藥物，分別具有影響胃腸活動、抗菌、抗病毒等作用；有解熱、鎮(zhèn)痛、抗菌消炎和解痙作用；有抗炎、抗病毒、抗變態(tài)反應(yīng)、保肝、提高機體免疫力等作用［2－4］。厚樸主要化學成分為厚樸酚與和厚樸酚［5］。白芷的主要活性成分為香豆素類成分和揮發(fā)油類成分，如歐前胡素、異歐前胡素。甘草主要成分有甘草酸、甘草次酸等。因此，為其主要有效成分制定質(zhì)量控制指標，對保證藿香正氣水質(zhì)量有重要意義。

1 儀器與試藥

Waters2695高效液相色譜儀（美國，Waters公司），包括四元泵，PAD二極管陣列檢測器，自動進樣器，Waters Empower 3工作站；KQ－500E臺式超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；SartoriusBP211D型十萬分之一電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；乙腈為色譜純（德國MERCK公司），水為娃哈哈高純水，其余試劑均為分析純。

對照品甘草酸（批號：110731－200907，GCS）、歐前胡素（批號：110826－200904，OQHS）、異歐前胡素（批號：110827－201007，YOQHS）、厚樸酚（批號：110756－200911，HPF）與和厚樸酚（批號：110730－2009061，HHPF）均購自中國藥品生物制品檢定所，純度經(jīng)HPLC（面積歸一法）檢測大于99.0%。藿香正氣水購自四川德元藥業(yè)集團有限公司（批號：090306）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Waters Symmetry C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為0.05%甲酸水溶液（A）－乙腈（B）；梯度洗脫：0～10min，40%B；10～25min，40%～45%B；25～30min，45%～50%B；30～60min，50%～55%B；流速1.0mL／min，柱溫40℃，檢測波長254nm，進樣量10μL。對照品及樣品色譜圖見圖1。在此色譜條件下，5個目標成分能夠很好地分離，峰形尖銳，無明顯的雜質(zhì)峰影響。5個目標成分的保留時間分別為12.8（GCS）、37.1（OQHS ）、40.2（HHPF ）、46.1（YOQHS）和50.3min（HPF）。

2.2 對照品溶液的制備

取上述5個成分的對照品適量，精密稱定，用乙腈溶解，分別配制成1.0μg／mL貯備母液；精密量取各成分母液適量，按比例配成含5個成分的混標溶液，其中5個成分的含量分別為93.50（GCS）、41.30（OQHS ）、18.15（YOQHS ）、311.0（HHPF）和235.0μg／mL（HPF），保存于4℃冰箱中，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取藿香正氣水適量，直接經(jīng)0.45μm濾膜過濾即得供試品溶液。

2.4 標準曲線和線性范圍

上述混標溶液用乙腈依次稀釋成系列濃度，進樣分析。每個濃度進樣3次，取平均值。以濃度對成分峰峰面積進行線性回歸。甘草酸、歐前胡素、異歐前胡素、厚樸酚、和厚樸酚的標準曲線分別為：y＝4.106x－11.09；y＝17.97x－8.436；y＝16.03x－5.807；y＝6.854x－6.512；y＝12.02x－235.4。線性范圍分別為93.50～467.5、41.30～206.5、18.15～90.75、235.0～1175和311.0～1555μg／mL，各成分標準曲線在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＞0.9999）

圖1 典型色譜圖對照品色譜圖（上）對照品（下）樣品

2.5 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液，一天內(nèi)連續(xù)進樣分析，計算日內(nèi)精密度；連續(xù)三天進樣分析，計算日間精密度。結(jié)果表明，各成分色譜峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，日間精密度和日內(nèi)精密度數(shù)據(jù)（RSD%）在0.20%～0.22%之間，說明儀器的精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗

同一批號的5份樣品按樣品含量測定方法進行測定，結(jié)果表明，各成分色譜峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，甘草酸、歐前胡素、異歐前胡素、厚樸酚、和厚樸酚含量的RSD值分別為1.34%，1.67%，0.80%，1.18%和1.23%。說明此方法的重復(fù)性好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，按樣品含量測定方法分別放置（貯存于4℃冰箱）在0，4，8，12，24h后，進樣分析。結(jié)果表明，各成分色譜峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，甘草酸，歐前胡素、異歐前胡素、厚樸酚、和厚樸酚含量的 RSD 值分別 為 0.39%，0.31%，0.34%，0.31% 和0.37%，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗

分別精密吸取已知含量的藿香正氣水溶液（55.7、26.4、12.6、106、103.5μg／mL）5份，稀釋為原濃度的1／4，分別精密加入上述對照品混標適量，分別進樣分析，結(jié)果甘草酸、歐前胡素、異歐前胡素、厚樸酚、和厚樸酚的平均回收率分別為99.31%，99.50%，99.53%，99.08%，99.17%。各成分平均加樣回收率均大于95.0%，符合定量要求。

2.9 樣品測定

按上述方法測定3個批次樣品，結(jié)果見表1。

表1 藿香正氣水中五個成分含量測定結(jié)果

3 討論

藿香正氣水中化學成分復(fù)雜，本研究建立了同時檢測甘草酸、歐前胡素、異歐前胡素、厚樸酚及和厚樸酚五種藿香正氣水標志性化學成分的HPLC方法，對復(fù)方制劑進行多指標的質(zhì)量控制，從而為藿香正氣水的質(zhì)量評價提供更為準確合理的方法。

本研究采用了萃取、索氏提取及不同溶劑處理，通過峰面積對比，確認采取了藥液直接過濾作為供試品溶液的方法，可以對該制劑厚樸、白芷和甘草三種藥材中的五種化學成分進行含量測定，并且方法操作簡便，減少實驗操作誤差。

本研究建立的多指標含量測定方法，用于藿香正氣水的質(zhì)量控制方法可靠，樣品不需要前處理，操作簡便，重復(fù)性強，對藿香正氣水的質(zhì)量控制具有較大的現(xiàn)實意義和應(yīng)用價值。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］吳經(jīng)耀，陳素紅，呂圭源.厚樸歸脾、胃、肺經(jīng)及相關(guān)藥理作用研究進展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2011，7（2）：147－149.

［3］張富強，聶紅，韋藝，等.白芷的化學與藥理研究進展［J］.南京中醫(yī)藥大學學報：自然科學版，2002，18（3）：190－192.

［4］田慶來，官月平，張波，等.甘草有效成分的藥理作用研究進展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006，18（2）：343－347.

［5］李平，何文妮，孫博航，等.厚樸超臨界提取物的化學成分研究［J］.中國現(xiàn)代中藥，2008，10（2）：26－27.