石榴不同品種及部位總黃酮含量分析

郭永誼，黃 漢，黃曉丹

（1.中山大學第五附屬醫院，廣東 珠海 519000；2.廣州天心制藥廠，廣東 廣州 51000）

石榴（Punica granatumL.）為石榴科Punicaceae石榴屬（Punica L.）落葉灌木或小喬木［1］，全世界共有1屬［石榴屬（Punica L.）］，2種，在我國各地區均有種植，種質資源豐富。它分為觀賞與食用兩種，營養價值高，同時也是珍貴的蜜源、藥用和化工產品原材料，應用十分廣泛［2］。根據口味不同分為酸石榴和甜石榴。石榴中的主要化學成分有：黃酮類、氨基酸、礦物質、鞣花酸、脂肪酸、多酚、維生素等［3］。其中黃酮類化合物的生理活性較廣泛，具較強的抗氧化作用，但在石榴不同部位的對比研究較少。本實驗旨在探討石榴不同品種及部位中總黃酮含量差異，為進一步充分利用石榴不同部位奠定理論基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AL204電子分析天平（梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司）；

SHB－3循環水多用真空泵（鄭州杜甫儀器廠）；721可見分光光度計（上海欣花儀器有限公司）；DK－600A型電熱恒溫水箱（上海一恒科技有限公司）；RE－52B旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 試藥

酸石榴、甜石榴（均采自新疆喀什當年產的新鮮石榴）；蘆丁（中國藥品生物制品檢定所，批號100080－200306）；乙醇（烏魯木齊化學試劑廠），5%亞硝酸鈉溶液，10%硝酸鋁溶液，4%氫氧化鈉溶液均由天津市海光化學試劑廠提供；以上試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 蘆丁對照液的制備

精密稱取120℃下恒溫干燥至恒重的蘆丁對照品10mg，置100mL容量瓶中，加70%熱乙醇適量使其溶解，后用70%乙醇定容至100mL，搖勻，制成0.1mg·mL－1的蘆丁對照液，備用。

2.2 供試品溶液的制備

分別稱取酸、甜石榴的石榴皮，隔膜，石榴籽，內種革皮質各5g，粉碎，加入10倍量蒸餾水，80℃提取1次，提取時間30min，過濾，濾液備用。

2.3 標準曲線的繪制［4］

分別精密吸取 0.0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL蘆丁對照品溶液置于10mL容量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉溶液0.3mL，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液4.0mL，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12min。于510nm波長處以試劑為空白，測其吸收光度，結果見圖1。

圖1 蘆丁標準曲線

2.4 石榴不同品種及不同部位中總黃酮含量測定

分別精密量取酸、甜石榴的石榴皮，隔膜，石榴籽，內種革皮質的提取液濾液各1mL于50mL容量瓶稀釋，再從中取2mL至25mL容量瓶中，按標準曲線項下方法顯色，測吸收度，從標準曲線方程計算總黃酮含量。酸石榴實驗結果見表1、圖2。甜石榴實驗結果見表2、圖3。

表1 酸石榴不同部位總黃酮含量

圖2 酸石榴不同部位總黃酮含量

表2 甜石榴不同部位總黃酮含量

圖3 甜石榴不同部位總黃酮含量

由表2、圖3可以看出，甜石榴總黃酮含量最高的是石榴皮，最低的是石榴籽，它們的差異達0.00097mg／mL。

2.5 酸石榴與甜石榴中總黃酮含量比較

對酸石榴和甜石榴的不同部位進行比較分析，結果見表3、圖4。

表3 不同品種不同部位總黃酮含量比較

圖4 酸石榴和甜石榴不同部位總黃酮含量比較

由表3、圖4可以看出，酸、甜石榴籽所含的總黃酮含量最低，分別為0.000063mg／mL，0.000032mg／mL。而石榴皮所含的總黃酮含量最高，酸石榴皮為0.001083mg／mL，甜石榴皮為0.001003mg／mL，其次是石榴內種皮革質，甜石榴內種皮革質所含的總黃酮含量為0.000647mg／mL，酸石榴內種皮革質含量為0.000857mg／mL。

3 結論

甜石榴和酸石榴所含的總黃酮含量在溫度80℃，比例1∶10，提取次數為1次，提取時間為30min的條件下提取，酸石榴各部位的總黃酮含量均比甜石榴的高，酸石榴和甜石榴不同部位總黃酮含量的大小順序為石榴皮﹥內種皮革質﹥隔膜﹥石榴籽。

4 討論

本實驗采用Folin－Ciocalteu法測定總黃酮，工作曲線線性良好，該方法操作簡單，效率高，設備要求低，顯色明顯。

本研究所測定的總黃酮量較低，與許宗運［5］測定的新疆南部石榴的石榴皮總黃酮含量6.23mg／g有差距，這可能與提取方法有關。有文獻顯示，用熱水浸提法提取，提取成本低，設備簡單、安全，但黃酮得率也較低［6］。由于本研究是定性比較不同石榴品種及部位總黃酮含量，為日后研究石榴不同部位的開發利用提供理論指導基礎與方向。

在制備原料的過程中，粉碎甜石榴原料時內種皮革質中含有多糖成分，機器運行散熱時，容易粘在機器內壁，在操作時應注意。

在實驗過程中甜石榴的提取液很難保存容易發霉，比酸石榴提取液穩定性差，所以要求樣品存放于冰箱中，并且要快速測定。

我國石榴資源豐富，如能加大對石榴的開發利用，不但可提高經濟效益，而且能更好地促進石榴在保健、藥用方面的研究發展。建議加強以下幾個領域的研究工作，一是對我國石榴種質資源進行全面系統的普查，比較研究不同產區石榴品種的有效物質如有機酸、脂肪酸、丹寧、多酚化合物、抗氧化劑等成分與含量，篩選出綜合性狀優良的石榴品種［7］；二是對石榴深加工產品進行系統研究，如石榴果汁、發酵石榴果汁、石榴果皮提取物及石榴籽油的研究與開發，篩選出保健功能顯著的石榴加工品；三是對石榴加工產品或石榴提取物進行臨床研究，探索其保健功能如抗癌、抗心血管疾病等的作用機理［8］。

［1］汪小飛，周耘峰，趙昌恒，等.36 個石榴（Punica granatum L.）品種的品質測定［M］.熱帶作物學報，2010（1）：31.

［2］苑兆和，尹燕雷，朱麗琴，等.石榴保健功能的研究進展［J］.山東林業科技，2008（1）：174.

［3］王如峰，向蘭，杜力軍，等.石榴的化學成分［J］.亞太傳統醫藥，2006（3）：61－70.

［4］吳靜，支金虎.石榴葉中總黃酮含量的測定［J］.河西學院學報，2009，22（2）：49.

［5］許宗運，蔣慧，吳靜，等.石榴皮和石榴渣總黃酮的測定［J］.中國農業科學，2003，19：72－75.

［6］陳紅梅.石榴皮黃酮類物質不同提取方法的比較［J］.安徽農學通報，2008（24）：17.

［7］汪小飛，向其柏，尤傳楷，等.石榴品種分類研究 ［J］.南京林業大學學報：自然科學版，2006，30（4）：63.

［8］陳魏.石榴的化學成分與藥理活性［J］.中國糧油學報，2009（4）：82.