雞新城疫疫苗不同劑量飲水免疫效果研究

尹 峰，王 超，薛會明*，韓春生

（1.吉林農業科技學院，吉林 吉林 132101；2.長春動物衛生監督所，長春 130401）

雞新城疫（ND）是由副粘病毒引起的禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病，又稱亞州雞瘟或偽雞瘟。主要特征是高熱、呼吸困難、便稀、神經紊亂、黏膜和漿膜出血。具有很高的發病率和死亡率，是危害養禽業的一種重要傳染病，已被世界動物衛生組織（OIE）列為A類疫病。且尚無有效治療藥物，只能依靠嚴格消毒、隔離和疫苗接種加以預防。新城疫弱毒疫苗的免疫方法有滴鼻、點眼和飲水等方法，而飲水免疫時，不同免疫劑量的免疫效果也不同，本文就7日齡雛雞采用新城疫Ⅳ系活疫苗不同飲水劑量免疫，通過第7、14、21、28、35、42天采血，監測新城疫血清抗體效價消長規律，探求最佳免疫劑量[1]。

1 試驗材料

健康海藍褐雛雞210羽購自無新城疫疫情孵化場。NDL弱毒活疫苗、法氏囊B87弱毒疫苗由吉林正業生物制品廠生產。ND標準抗原及陽性血清、0.5%雞紅細胞懸液、96V孔型微量血清反應板、微量振蕩器、微量移液器和恒溫培養箱均由吉林農業科技學院傳染病實驗室提供。

2 試驗方法

2.1 試驗分組

將健康的海蘭褐雛雞210只雞隨機分為5個試驗組和1個對照組，每組35只。于7日齡進行NDL弱毒活疫苗免疫，自由采食和飲水，14日齡進行法氏囊弱毒疫苗2倍量飲水免疫[2-3]。每天記錄雞群死淘情況、精神狀況、糞便性狀及采食飲水情況。具體試驗雞分組及處理方法見表1。

表1 試驗雞分組及處理方法

2.2 免疫方法

免疫前對雞群停水2～3 h，疫苗采用涼開水稀釋，并加入脫脂奶粉0.2%～0.3%，飲水免疫的用水量以7日齡每1 000羽雞約10 000 mL水量計[4]。按此比例將脫脂奶粉先溶于水中，再將涼開水稀釋的NDL弱毒活疫苗加入水中并輕輕混勻，于1～2h內飲完，滴鼻免疫時將1000羽疫苗用33mL專用稀釋液稀釋，每只雞滴鼻1滴[5]。免疫時舍內溫度要比正常提高1～2℃。

2.3 采血方法

第7天接種疫苗前采血1次，供測定母源抗體水平用。第14、21、28、35、42天每組隨機抽取5只雞，采用心臟或翅靜脈采血1.5 mL，置于37℃恒溫箱中4 h，待血清析出后，以3 000 rpm離心15 min，無菌分離血清，裝瓶待用[6]。

2.4 0.5%紅細胞的制備

先用滅菌注射器吸取3.8%枸櫞酸鈉溶液（其量為所需血量的1/5），從雞翅靜脈或心臟采血至需要血量，置滅菌離心管內，加滅菌生理鹽水為抗凝血的2倍，2 000 rpm離心10 min，棄上清液，再加生理鹽水懸浮血球，同上法離心沉淀，洗滌3次，最后根據所需用量，用滅菌生理鹽水配成0.5%雞紅細胞懸液[7]。

2.5 血凝抑制試驗

試驗在96V孔型微量血清反應板上進行，用固定病毒稀釋血清的方法，自第1～11孔各加25 mL生理鹽水[8-9]。第1孔加被檢雞血清25 mL，吹吸混合均勻，吸25 mL至第2孔，依此連續倍比稀釋至1 024倍，倍比稀釋至第10孔，吸棄25 mL，第12孔加新城疫陽性血清25 mL，作為血清對照。

自第1～12孔各加25 mL 4個血凝單位的新城疫病毒液，其中第11孔為4單位新城疫病毒液對照，振蕩混合均勻，置室溫中作用20 min。自第1～12孔各加0.5%雞紅細胞懸液25 mL，振蕩混合均勻，恒溫培養箱作用20 min后觀察結果。

2.6 判定方法

待病毒對照孔（第11孔）出現紅細胞100%完全凝集（++++），而血清對照孔（第12孔）為完全不凝集（-）時，即可進行結果觀察，將反應板傾斜45°，沉于管底的紅細胞沿著傾斜面向下呈流線狀流動者為沉淀，表明紅細胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的紅細胞鋪平孔底，凝成均勻薄層，傾斜后紅細胞不流動，說明紅細胞被病毒所凝集。能完全抑制4單位病毒物質凝集紅細胞作用的血清最高稀釋倍數為該血清的紅細胞凝集效價，用被檢血清的稀釋倍數或以2為底的對數（log2）表示。100%抑制凝集（完全不凝集）的被檢血清最大稀釋度為該血清的血凝抑制效價，即HI效價[10]。

3 試驗結果

雞新城疫疫苗不同劑量免疫試驗結果見表2。

表2 雞新城疫疫苗不同劑量免疫試驗結果平均值 log2

由表2可知，不同劑量的新城疫疫苗進行飲水免疫均能引起雞體免疫反應的產生和免疫保護，4倍量飲水免疫比3倍量飲水免疫抗體水平高，和5倍量免疫抗體水平相比差異不顯著，綜合成本和產生的抗體水平，實際生產中以4倍量飲水免疫較適宜。但飲水免疫無論2、3、4、5倍，其產生的抗體水平都不如滴鼻法產生的抗體水平高。

4 結論

本試驗結果表明，在7日齡前雛雞母源抗體能夠起到保護作用，隨著日齡的增長，母源抗體有下降的趨勢，在7～14日齡之間母源抗體雖然能維持2.3以上，但此時的母源抗體已不能抵御強毒入侵。用2、3、4、5倍不同劑量的疫苗進行飲水免疫均能引起雞體免疫反應的產生和免疫保護。綜合免疫效果和成本考慮，在進行飲水免疫時4倍量效果最佳，而滴鼻法免疫后第21天抗體效價達12.6，明顯高于不同劑量飲水方法而產生的抗體水平，因此飲水和滴鼻方法比較，以滴鼻法為最佳。

[1]趙瑞宏,張丹俊,潘孝成,等.不同新城疫疫苗和免疫途徑對雞新城疫HI抗體的影響[J].現代農業科技,2009（19）:303-304.

[2]楊新年.家禽疫苗的正確使用[J].安徽農學通報,2005,11（3）:58.

[3]劉華,涂健,祈克宗,等.雞新城疫首次免疫采用飲水法的可行性研究[J].安徽農業科學,2006,34（16）:3 999-4 000.

[4]孔祥軍,崔世寧.蛋雞免疫接種應注意的問題[J].養殖技術顧問,2008（04）:103.

[5]Douglas G.蛋雞免疫程序及免疫技術[J].中國家禽,2006,28（17）:38-44.

[6]高源.肉雞和蛋雞的免疫程序[J].農村科技開發,2003（12）:24.

[7]辛朝安.禽病學[M].北京:中國農業出版社,2003.

[8]薛會明,孟巖,王振輝.預防獸醫學（第二版）[M].長春:吉林人民出版社,2009.

[9]靖寧,羅國喜.雞新城疫母源抗體消長規律和免疫保護抗體臨界值的測定[J].當代畜牧,2007（3）:9-10.

[10]孟凡生,魏壽元,密家自,等.雞新城疫抗體監測技術的應用與回顧[J].中國畜禽傳染病,1994（5）:43-44.