反相離子對高效液相色譜法測定鹽酸乙胺丁醇片中鹽酸乙胺丁醇含量*

薛士榮

(天津市大港藥品檢驗所，大港 300270)

鹽酸乙胺丁醇是一種抗結核病藥物，常與異煙肼、鏈霉素等聯合用藥，以增強療效，并延緩細菌耐藥性的產生。由于鹽酸乙胺丁醇沒有紫外吸收官能團，不能通過常規的高效液相色譜-紫外檢測法進行檢測，《中國藥典》2005年版中是采用非水滴定法進行含量測定[1]。本文根據鹽酸乙胺丁醇與銅離子絡合得到的絡合物有較強的紫外吸收,在酸性條件下該絡合物與庚烷磺酸鈉形成離子對,用反相離子對色譜法可測定鹽酸乙胺丁醇的含量[2-4]。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀 LC-2010C，島津高效液相色譜儀工作站LC-Solution，鹽酸乙胺丁醇對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號100165-200103)，四氫呋喃、磷酸、庚烷磺酸鈉均為色譜純，硫酸銅為分析純，水為純化水。鹽酸乙胺丁醇片(沈陽某藥廠，批號0902101、0909131、0910111)。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Diamond C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動相：四氫呋喃-0.4%庚烷磺酸鈉(含有0.016%硫酸銅,用磷酸調pH至4.5±0.5)(25∶75)；流速1.0 ml/min;檢測波長 258 nm;柱溫:40 ℃，進樣量20 μl。

2.2溶液的配制

2.2.1對照品溶液的制備 取鹽酸乙胺丁醇對照品置干燥箱中105 ℃干燥2 h后，精密稱取9.87 mg，置50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml含0.197 4 mg鹽酸乙胺丁醇的對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 取本品10片,研成細粉,混合均勻,精密稱取適量(約相當于含鹽酸乙胺丁醇20 mg)置于100 ml量瓶中,加入水適量,振搖使主藥溶解,再用水稀釋至刻度,搖勻,過濾,作為供試品溶液。

2.2.3空白輔料溶液的制備 按處方比例制備不含鹽酸乙胺丁醇的空白樣品，按“2.2.2”項下方法制成空白輔料溶液。精密量取對照品溶液、供試品溶液和空白溶液各20 μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。色譜見圖1。

1.鹽酸乙胺丁醇

2.3線性關系的考查 精密吸取含有2.55 mg/ml鹽酸乙胺丁醇對照品溶液1、2、4、6、8和10 ml，分別置50 ml量瓶中，加水稀釋至刻度搖勻。按“2.1”項下的色譜條件，分別進樣20 μl，記錄峰面積。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行回歸分析，得回歸方程Y=16 129 145.2X-11 184.9(r=0.999 6)。結果表明：鹽酸乙胺丁醇濃度在0.051～0.51 mg/ml范圍時，線性關系良好。

2.4精密度試驗 取“2.2.1”項下的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件，連續進樣5次，測得峰面積值的RSD為0.06%，表明進樣精密度良好。

2.5重復性試驗 取同一批樣品(批號0910111)6份，按“2.2.2”項下方法配制供試品溶液，采用“2.1”項下色譜條件分別測定鹽酸乙胺丁醇的含量，結果測得鹽酸乙胺丁醇的平均含量為97.99%，RSD為0.08%。表明本方法重現性良好。

2.6穩定性試驗 取樣品(批號0910111)，按“2.2.2”項下方法配制，每隔3 h進樣1次，共5次，結果RSD為0.18%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.7加樣回收 精密稱取已知含量同一批樣品(批號0910111)細粉約相當于含鹽酸乙胺丁醇10 mg(本法測得樣品含量97.99%)共6份，分別精密加入濃度為1.02 mg/ml鹽酸乙胺丁醇對照品溶液10 ml。按“2.2.2”項下方法配制，按“2.1”色譜條件測定鹽酸乙胺丁醇的含量，鹽酸乙胺丁醇的平均回收率為99.4%，RSD為0.68%。結果見表1。

表1 回收率試驗結果(n=6)

2.8含量測定 取3批樣品，分別按供試品溶液的制備方法制備待測溶液。精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μl,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標法以峰面積計算樣品中鹽酸乙胺丁醇的含量，結果見表2。

表2 鹽酸乙胺丁醇片劑含量測定結果(n=3)

3 討論

3.1流動相的選擇 分別采用乙腈、四氫呋喃為有機相試驗，前者峰形不好，理論塔板數偏低。四氫呋喃雖黏度稍大，但分離度、峰形均很好，保留時間穩定，故選擇四氫呋喃為有機相。

3.2流動相pH的影響 在本實驗中,考查了流動相不同pH值(3.0、4.0、5.0、6.0用磷酸或氨水調節)對測定的影響。當流動相的pH值逐漸增大時, EMB的峰形隨之變得尖銳和狹窄。然而,當pH值調節為4～5時,色譜圖的峰形變化不大，并且理論塔板數(n)均大于6 000、拖尾因子(T)均在0.95～1.05之間。故選擇流動相pH值為4.5±0.5。

3.3含量測定方法的選擇 本文測定鹽酸乙胺丁醇片含量用《中國藥典》2005年版方法和HPLC法做了比較。《中國藥典》方法采用三氯甲烷多次提取的非水滴定法，其中有機溶劑的大量使用易對人體造成危害，并且在提取液濾過時，取無水硫酸鈉的量對結果也有一定的影響，不易得到平行結果，此法操作較煩瑣。HPLC法測定了鹽酸乙胺丁醇片的含量，溶劑為水，方法簡便準確，靈敏度高。適用于鹽酸乙胺丁醇片的質量控制。

1 中國藥典. 二部.2005：456

2 孫進，宋洪濤，張天虹，等.柱前衍生化高效液相色譜法測定固定劑量復方抗結核制劑中鹽酸乙胺丁醇的含量和溶出度.色譜，2006,24(2)：164

3 戚燕,楊慶云,吳松. 反相離子對高效液相色譜法測定四聯抗結核復方制劑中鹽酸乙胺丁醇的含量.藥物分析雜志，2009,29(4):645

4 趙瑞仙，胡萍，吳秀玲，等.RP-HPLC法測定鹽酸乙胺丁醇片的含量.大理學院學報，2007,6(10):10