RPHPLC法測定吲哚美辛貼片中吲哚美辛的含量*

張振波，周健鵬

(1.天津市天和醫院，天津 300050； 2.天津市藥品檢驗所，天津 300070)

吲哚美辛又名消炎痛，為非甾體抗炎藥，是最強的COX抑制劑之一，有突出的消炎作用。吲哚美辛貼片在《中國藥典》2005版中有收載，但含量測定采用的是紫外-可見分光光度法，本制劑處方中的一些輔料及降解雜質在該檢測波長下可能有紫外吸收，不甚合理；國內外關于吲哚美辛貼片含量測定的報道較少；本文參考國外多國藥典，建立HPLC法測定吲哚美辛貼片中吲哚美辛的含量，方法簡便、易行、準確度高。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(DAD檢測器)； METTLER AE 240天平。甲醇為色譜純，水為去離子水，乙醇、磷酸為分析純。吲哚美辛貼片(35 mg/片，14 cm×10 cm)和吲哚美辛對照品(日本A廠家提供，對照品及品質報告書經中國藥品生物制品檢定所復核)。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)，以甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)為流動相，檢測波長為228 nm，進樣量10 μl。理論板數按吲哚美辛峰計算應不低于3 000，吲哚美辛峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液 精密稱取吲哚美辛對照品適量，加50%乙醇溶液溶解并稀釋制成每1 ml中含0.1 mg的溶液作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液 取本品10片，小心除去覆蓋的塑料片，將粘貼面對折，用潔凈的剪刀剪成小塊，精密稱取適量(約相當于吲哚美辛10 mg)，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇溶液100 ml，加塞，超聲1 h(超聲過程中保持水浴溫度不超過32 ℃)，取出，強烈振搖60 s，放置，再振搖60 s，取部分溶液，離心5 min(1 000 r/min)，取上清液作為供試品溶液。取對照品和供試品溶液各10 μl，依“2.1”項下色譜條件進樣，色譜圖，見圖1。

2.3線性關系考察 精密稱取吲哚美辛對照品適量，加50%乙醇溶液溶解并稀釋制成0.5 mg/ml的溶液，作為對照品儲備液。精取適量，用50%乙醇溶液稀釋制成一系列濃度的線性溶液，分別精密量取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以濃度為橫坐標(X)，以相對應的峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸。吲哚美辛線性方程為Y=27.312X-0.032(n=6，r=1.000)。實驗結果表明主成分吲哚美辛在10～200 μg/ml范圍內線性關系良好。

2.4精密度與重復性試驗

2.4.1系統精密度 取對照品溶液10 μl重復進樣5次，以峰面積來考察精密度，計算RSD為0.1%。

2.4.2方法精密度 取供試品6份制備供試品溶液，依“2.1”項下色譜條件進樣，結果測得含量分別為98.1%、97.65%、98.83%、99.25%、98.13%和98.50%，RSD為0.6%。

2.5穩定性試驗 取對照品溶液及供試品溶液分別在室溫放置不同時間(0、3、8、14和24 h)后依法測定，按吲哚美辛峰面積計算RSD分別為0.05%和1.23%。結果表明, 吲哚美辛溶液在24 h內基本穩定。

2.6加樣回收率試驗 取吲哚美辛對照品適量，加50%乙醇溶解并稀釋制成每1 ml中含1.0 mg的溶液，作為對照品儲備溶液。精密稱取供試品適量(約相當于主藥吲哚美辛2 mg)9份，置50 ml量瓶中，分別精密加入對照品儲備液4、5和6 ml各3份，濃度分別為0.12、0.14和0.16 mg/ml，按上述方法分別測定，以測得藥量與加入藥量之比計算回收率。經試驗，本方法平均回收率為99.6%(n=9)，RSD為1.1%。見表1。

2.7含量測定 分別取3批樣品，制備供試品溶液，精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，按標示量的百分含量計算，3批樣品中吲哚美辛含量分別為98.4%、97.1%和98.2%。

表1 回收率試驗結果(n=9)

2.8主峰純度測定 分別取吲哚美辛對照品和供試品進行主峰純度分析，結果顯示，對照品純度因子為999.994，供試品純度因子為999.995。

3 討論

3.1檢測波長選擇 稱取吲哚美辛對照品適量，加50%乙醇溶液溶解并稀釋制成每1 ml中含0.1 mg的溶液，在200～400 nm波長下掃紫外圖譜。吲哚美辛在206、228和318 nm波長下有最大吸收。考慮流動相及溶劑中甲醇、乙醇的末端吸收效應，各雜質在318 nm波長下無紫外吸收，故選擇檢測波長為228 nm。

3.2流動相的選擇 參考《中國藥典》2005年版二部、BP 2008、EP 5.0、USP 31、JP 15收載的吲哚美辛及其制劑，分別考察甲醇-水-磷酸(700∶300∶1)、甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)、甲醇-水(400∶600∶1)、乙腈-水(1∶1，其中含0.01 mol/L磷酸二氫鈉和0.01 mol/L磷酸氫二鈉)作為流動相。在甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)系統下，供試液主峰、輔料峰、各降解雜質峰之間的分離度良好，分析時間恰當。故以甲醇-水-磷酸(600∶400∶1)為流動相，溶劑為50%乙醇。

3.3輔料的研究 由于提供樣品的國外廠家未提供空白貼片，因此未能提供空白輔料的色譜圖，但要求廠方提供了處方，對處方中有紫外吸收的輔料分別進行了定位，供試品色譜圖中的色譜峰依次為克羅米通、麝香草酚藍、吲哚美辛，各成分之間分離度符合要求。

該項研究可為我國藥品檢驗提供快速、準確、靈敏的測定方法，研究結果可以為將來《中國藥典》提高貼劑質量標準提供詳實的數據，完善貼劑質量控制方法，在確保藥品安全性方面具有重要的社會意義。