細菌內毒法檢查奧拉西坦注射液的探討*

張雪梅，謝冬梅

(1.亳州職業技術學院藥學系,毫州 236800； 2.安徽蚌埠醫學院第一附屬醫院,蚌埠 233004)

奧拉西坦注射液的主要成分為奧拉西坦，輔料為磷酸二氫鈉和乙二胺四乙酸二鈉鹽。本品為幾乎無色或微黃色澄明液體，用于腦損傷及其引起的神經功能缺失，記憶與智能障礙的治療，據文獻報道，不良反應少見，故臨床應用廣泛，但迄今尚未見用細菌內毒素檢查法檢查奧拉西坦注射液的報道。又因為細菌內毒素法具有操作簡單，檢測周期短，靈敏度高，結果準確等優點，因此可以對注射液進行質量控制[1-3]。本文參照2010年版《中國藥典》(二部)細菌內毒素檢查法及其指導原則，對其細菌內毒素檢查方法進行探討。

1 儀器與試藥

電熱恒溫水浴鍋(江蘇省醫療器械廠，型號HH.214)，旋渦混合器(上海醫科大學儀器廠，型號XW-80A)，其它除無熱原吸頭外，均經250 ℃干烤2 h。奧拉西坦注射液(廣東世信藥業有限公司，規格5 ml∶1.0 g，批號0709006、0802002、0805001)。鱟試劑(TAL)(湛江安度斯生物有限公司，規格0.1 ml/支，靈敏度λ=0.25 Eu/ml，批號0704162；湛江海洋生物制品廠，規格0.1 ml/支，靈敏度λ=0.25 Eu/ml批號0801052)。細菌內毒素工作標準品(中國藥品生物制品檢定所，規格120 Eu/支,批號2005-3)。細菌內毒素檢查用水(BET水)(湛江安度斯生物有限公司，規格5 ml/支，批號0703130)。

2 方法與結果

2.1鱟試劑靈敏度復核 依據2010年版《中國藥典》規定方法，將細菌內毒素工作標準品用細菌內毒素檢查用水溶解，于旋渦混合器上混合勻15 min分別稀釋為2.0、1.0、0.5和0.25 λ 4個濃度等級的內毒素標準溶液,每稀釋一步均在旋渦混合器上混合30 s。每一濃度平行作4支，每管加入待復合的鱟試劑0.1 ml和內毒素標準溶液0.1 ml，用細菌內毒素檢查用水作2支陰性對照管，共18管，輕輕搖勻后，封閉管口，垂直放入(37±1) ℃恒溫水浴箱中，保溫(60±2) min，結果見表1。鱟試劑靈敏度復核結果顯示0.5 λ<λc<2 λ,表明鱟試劑靈敏度符合規定，可用于試驗。

2.2細菌內毒素限值(L)的確定 按照《中國藥典》2010年版(二部)規定的方法，根據公式致熱閾值L=K/M，其中K為按規定的給藥途徑人用每kg體重每h最大可接受的內毒素劑量注射劑K=5 Eu/kg·h-1，M為人用每kg體重每h的最大藥物劑量，人均體重按60 kg計，注射時間按1 h計，每h人體最多可以接受的奧拉西坦注射量為M=20 ml/60 kg·h-1,L=K/M=5.0 EU/kg·h-1÷(20 ml/ml÷60 kg)=15 EU/ml。

表1 鱟試劑靈敏度復核結果

2.3干擾試驗稀釋倍數MVD計算[4]鱟試劑的靈敏度(λ)范圍一般在0.33～1.0 Eu/ml之間，以鱟試劑靈敏度為0.25 Eu/ml為基準，MVD=CL/λ=1.0 ml×15 EU/ml/0.25=60倍

2.4樣品干擾試驗 選擇60倍的樣品稀釋液為試驗濃度，用BET水將細菌內毒素工作標準品稀釋成2.0、1.0、0.5和 0.25 λ的內毒素系列溶液,用60倍樣品稀釋液將同一支細菌內毒素工作標準品稀釋成2.0 、1.0、0.5和0.25 λ的供試品系列溶液。讓靈敏度為0.25 Eu/ml的兩個不同廠家的TAL與上述兩個系列溶液反應，結果見表2。表明其Es值均在0.5～2.0 λ之間，且Et值在0.5～2.0 Es范圍內。說明樣品60倍稀釋液對細菌內毒素檢查無干擾作用，因此本品的檢查可用細菌內毒素法代替家兔法。

表2 供試品干擾試驗結果

2.5樣品檢查試驗 取3批供試品，按2010年版《中國藥典》(二部)要求，考察其內毒素限值，結果見表3。

表3 樣品細菌內毒素檢測結果

3 討論

奧拉西坦注射液的60倍稀釋液，用λ=0.25 Eu/ml的鱟試劑進行細菌內毒素檢查，是排除干擾因素最簡單的方法。不同廠家生產的TAL在生產工藝、質量參數等各方面有一定的差異，這影響到TAL的抗干擾能力，故本實驗采用不同廠家的鱟試劑對3個批號的樣品進行干擾實驗。結果分別使用不同廠家的TAL，3批樣品稀釋60倍均不干擾細菌內毒素檢查。

1 石慶平，丁 峰，郭 輝.復方維生素注射液(4)細菌內毒素檢查法的建立.安徽醫藥，2006，10(1)：64

2 劉毅萍，夏愛光.注射用乙酰谷酰胺的細菌內毒素檢查法.安徽醫藥，2007，11(1)：89

3 趙云燕. 鱟試劑用于復方醋酸鈉注射液細菌內毒互檢測的探討.安徽醫藥，2001，5(3)：224

4 黃清泉，許全明，夏振民，等.泰素帝細菌內毒素檢查法的建立.中國藥房，1996，7(2)：85