正交試驗法優選血府逐瘀滴丸的提取工藝*

朱曉晶 ， 楊欣瑩 ， 李鳳閣

(天津宏仁堂藥業有限公司，天津 300122)

血府逐瘀滴丸是由《中華人民共和國衛生部藥品標準》中藥成方制劑第5冊和第16冊中“血府逐瘀膠囊”改進劑型和工藝而制成。處方由桃仁、當歸、枳殼、川芎等11味藥組成，具有活血祛瘀，行氣止痛之功效，主治瘀血內阻，胸痛或頭痛，內熱瞀悶，失眠多夢，心悸怔忡，急躁善怒。方中所有藥味擬采用滲漉提取法，以乙醇為提取溶劑。其中當歸、川芎兩味藥中主要活性成分阿魏酸(sodium ferulate)對心肌缺血有很好的保護作用，具有明顯抗缺血心肌再灌注損傷作用[1]。本試驗采用正交設計法，以阿魏酸的提取效果和轉移率為評價指標，對血府逐瘀滴丸的乙醇滲漉提取工藝條件進行研究，確定最佳工藝條件。

1 儀器與試藥

島津LC-2010A高效液相色譜儀；色譜柱: Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；阿魏酸對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號110773-9910)；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1滲漉提取工藝的正交試驗設計 選用正交試驗法，采用 L9(34)正交設計表，分別以干膏中阿魏酸的含量、轉移率和干膏得率為指標，對乙醇濃度、乙醇用量、浸泡時間、流速4個因素進行考查，每個因素選取3水平。正交試驗因素水平表見表 1。其中，阿魏酸的含量測定參考2005年版《中國藥典》中當歸藥材對阿魏酸的含量測定方法進行；轉移率(%)=浸膏中阿魏酸的含量(mg/g)×浸膏重量(g)/當歸川芎中阿魏酸的總量(mg)×100%

2.2正交試驗結果及方差分析 按處方比例，稱取桃仁、當歸、枳殼、川芎等藥材共9份，每份625 g，分別按照L9(34)正交設計表進行試驗，滲漉液分別濃縮得浸膏，測定阿魏酸的含量，并計算轉移率，結果見表2。

用 SPSS軟件對正交試驗結果進行方差分析，得統計學結果，方差分析結果見表3和表4。

表1 滲漉提取工藝因素水平表

表2 正交設計方差及直觀分析結果

表3 阿魏酸含量方差分析結果

表4 阿魏酸轉移率方差分析結果

2.3結果分析 分別以阿魏酸含量和轉移率為評價指標，直觀分析結果表明，各因素作用主次為A>B>D>C，最佳工藝條件為A2B2C2D2。方差分析結果表明，因素A乙醇濃度對兩個指標具有顯著意義，應選取A2水平；其他三個因素即乙醇用量、浸泡時間、流速均無顯著性意義。綜合分析上述結果，確定最佳工藝條件為A2B2C2D2，即藥材加入13倍量65%乙醇，靜置浸泡24 h，以10 ml/min流速滲漉提取。

2.4最佳工藝驗證實驗 按處方比例稱取藥材3份，按優選工藝條件進行重復驗證試驗，結果表明正交試驗優選的乙醇滲漉提取工藝條件較好，結果穩定可靠，見表5。

表5 驗證試驗結果

3 討論

3.1試驗結果表明，所選擇的4個因素對乙醇滲漉提取有不同的影響，由方差分析可知，乙醇濃度對兩個指標具有顯著意義，而其他3個因素即乙醇用量、浸泡時間、流速均無顯著性意義，因此試驗中要嚴格控制乙醇濃度。

3.2川芎、當歸在處方中屬于臣藥，均含有阿魏酸[2]，其性質穩定，毒性較低。據報道阿魏酸具有抑制血小板凝聚及血栓形成、抗腫瘤、免疫功能等作用[3，5]，故選定阿魏酸為含量測定標準。

1 齊守罡，呂吉元，張明升，等.阿魏酸對正常及缺血/再灌注損傷大鼠離體心臟功能的影響.中西醫結合心腦血管病雜志，2008，6(5)：562-564

2 楊林，羅曉星，王四旺，等。正交設計提取當歸川芎中阿魏酸的研究.云南中醫學院學報，2007，30(2):14

3 周國蘭.阿魏酸鈉治療不穩定型心絞痛50例療效觀察.內科，2010，5(3)：241

4 楊艷霞，趙浩如.阿魏酸磷脂復合物的理化性質及抗腫瘤活性研究.藥學與臨床研究，2009，17(4)：297

5 高向東，吳梧桐.當歸及其成分阿魏酸對小鼠免疫功能的影響.中國生化藥物雜志，1994，15(2)：107