高效液相色譜法測(cè)定注射用頭孢替唑鈉的含量*

于 和，林 宏，林 瀾

(1．天津市兒童醫(yī)院，天津 300074； 2.天津新豐制藥有限公司,天津 300457)

頭孢替唑鈉(ceftizoxime sodium)是第一代頭孢菌素抗生素，作用機(jī)制為抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成而發(fā)揮其抗菌活性。對(duì)革蘭陽(yáng)性菌，包括產(chǎn)青霉素酶和不產(chǎn)生青霉素酶的金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌等皆比較敏感，對(duì)某些革蘭陰性菌呈中度敏感，如大腸桿菌、克雷白菌屬等。本文介紹HPLC法對(duì)注射用頭孢替唑鈉的含量測(cè)定及其方法學(xué)的系統(tǒng)研究。

1 儀器與試藥

Waters液相色譜系統(tǒng)(Waters515型高效液相色譜儀，Waters 2487紫外檢測(cè)器)。注射用頭孢替唑鈉(規(guī)格0.5 g，批號(hào)080901、080902、080903)和對(duì)照品均由天津新豐制藥有限公司提供。乙腈為色譜純；枸櫞酸為化學(xué)純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為YMC Pack ODS-A C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相為枸櫞酸溶液(取枸櫞酸3 g，加水溶解并稀釋至900 ml)-乙腈(9∶1)；流速1 ml/min；柱溫40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；進(jìn)樣量20 μl。

2.2溶液制備

2.2.1對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取頭孢替唑?qū)φ掌?0 mg，置200 ml量瓶中，以磷酸鹽緩沖液(pH 7.0，0.1 mol/L)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液10 ml至100 ml量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2樣品溶液制備 精密稱(chēng)取注射用頭孢替唑鈉適量，按“2.2.1”項(xiàng)下方法，制得250 μg/ml樣品儲(chǔ)備液及25 μg/ml的樣品溶液。

2.3線(xiàn)性試驗(yàn) 分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液8、9、10、11及12 ml，各置于100 ml量瓶中，用磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)稀釋至刻度，制得濃度為20、22.5、25、27.5及30 μg/ml的 對(duì)照品溶液，分別依法進(jìn)樣，記錄峰面積。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，線(xiàn)性方程為Y=4.18×104X+1.51×104(r=0.999 6)，結(jié)果表明，頭孢替唑鈉在20～30 μg/ml范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.4準(zhǔn)確度試驗(yàn) 采用加樣回收試驗(yàn)方法，精密量取樣品儲(chǔ)備液(250 μg/ml)5 ml置100 ml量瓶中，共9份。分別精密加入對(duì)照品(88.7%)儲(chǔ)備液(250 μg/ml) 4、5、6 ml各3份，用磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)稀釋至刻度，搖勻，依法進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算回收率，平均加樣回收率100.6%，RSD為0.7%。見(jiàn)表1。

2.5精密度試驗(yàn) 取同一份樣品依法測(cè)定頭孢替唑鈉含量，平行測(cè)定6次，計(jì)算保留時(shí)間、峰面積，峰高的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)分別為0.75%、0.56%和0.31%，均小于1.0%。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品溶液常溫下放置，分別于0、1、2、3、4、5、6、8、10及12 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)為0.66%，故樣品溶液在12 h內(nèi)測(cè)定含量結(jié)果穩(wěn)定。

表1 注射用頭孢替唑鈉加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7檢測(cè)限和定量限

2.7.1檢測(cè)限 按照信噪比為3∶1，比較已知濃度樣品測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)，計(jì)算能被可靠檢出的最低濃度是0.05 μg/ml，故定量檢測(cè)限為1 ng。

2.7.2定量限 按照信噪比為10∶1，比較已知濃度樣品測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)，計(jì)算能被可靠檢出的最低濃度是0.20 μg/ml，故定量限為4 ng。

2.8含量測(cè)定 在上述色譜條件下，精密稱(chēng)取3批樣品適量，用磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)溶解并稀釋制成每1 ml中含頭孢替唑25 μg的溶液，精密量取20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取頭孢替唑?qū)φ掌愤m量，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算出供試品中頭孢替唑的含量，見(jiàn)表2。

表2 樣品中頭孢替唑含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1色譜柱的影響 選擇4個(gè)廠(chǎng)家、4種填料、2種柱長(zhǎng)的色譜柱按照含量測(cè)定方法對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：不同色譜柱對(duì)含量測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響。

3.2溶劑的影響 選擇3種不同牌號(hào)的國(guó)產(chǎn)乙腈和進(jìn)口Fisher乙腈，配制流動(dòng)相，測(cè)定樣品含量、溶劑變化對(duì)含量測(cè)定的影響，結(jié)果表明：乙腈溶劑的變化對(duì)含量測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響。

3.3流動(dòng)相的影響 不同流動(dòng)相比例[枸櫞酸緩沖液(枸櫞酸3 g，加水900 ml溶解)-乙腈的比例為60∶40、70∶30、80∶20、85∶15及90∶10]，結(jié)果表明流動(dòng)相比例為90∶10得到的主成分峰與溶劑峰能良好分離，理論塔板數(shù)最高，峰型最優(yōu)。

3.4柱溫和流速的影響 柱溫變化(30、35、40 ℃)、選擇不同流速(0.5、1.0和1.5 ml/min)對(duì)色譜分離的影響。結(jié)果表明柱溫在40℃、流速為1.0 ml/min的條件下得到的色譜峰保留時(shí)間適中、峰型最好。

研究表明，建立的HPLC法測(cè)定注射用頭孢替唑鈉含量，省時(shí)、準(zhǔn)確、靈敏度高，回收率好，可用于產(chǎn)品質(zhì)量控制。

1 中國(guó)藥典.二部.2005：附錄172

2 胡昌勤.分離分析方法對(duì)抗生素產(chǎn)品質(zhì)量的影響.中國(guó)抗生素雜志，2005，30(1)：20