米格列醇片溶出度HPLC檢測方法改進研究*

郝光啟，李進啟，葛 梅，孫彥余，姜合田，李 偉，沈慶欽

(魯南制藥集團股份有限公司，臨沂 276006)

米格列醇(C8H17NO5)為去氧野尻霉素衍生物，是一種新型口服α-葡萄糖苷酶抑制劑。其降糖作用的機制是通過在小腸內可逆性抑制α-葡萄糖苷酶，減少糖類分解為葡萄糖，并能延遲小腸中葡萄糖的吸收，從而降低飯后血糖升高的幅度[1]。但依據國家食品藥品監督管理局標準(YBH00592010)檢測時發現：米格列醇峰與其雜質峰分不開、重復性試驗差(主峰響應值逐漸變小,連續進樣分析時米格列醇峰面積的RSD大于20%。)且保留時間亦有變動，導致無法正常檢測。實驗通過改變流動相組成及pH值建立新方法，新方法專屬性強、靈敏度高、準確度和重復性好、方法簡便，可用于米格列醇片溶出度的定量測定。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1100高效液相色譜系統：G1379A脫氣機、G1311A四元泵、G1313A自動進樣器、G1316A柱溫箱、G1315B DAD檢測器、A.10.01化學工作站(美國安捷倫公司)，ZRS-8G智能溶出試驗儀(天津海益達科技有限公司)，YB系列真空恒溫干燥箱(天津藥典標準儀器廠)，TTL-10B超純水系統(北京同泰聯科技發展有限公司)，PHS-3C型精密pH計(上海精密科學儀器有限公司)，XS204型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2試藥 米格列醇對照品(本公司生產的原料藥，經HPLC面積歸一化法測定純度為99.8%以上)，米格列醇片(本公司生產，批號081201、081202、081203)。乙腈為色譜純(山東禹王實業集團化工分公司)，磷酸二氫銨、三乙胺均為分析純，實驗用水為超純化水。

2 方法與結果

2.1色譜條件及系統適用性 色譜柱：Lichrospher氨丙基硅烷鍵合硅膠色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫銨溶液(三乙胺調pH至7.5)(65∶35)；檢測波長210 nm；流速1.0 ml/min；進樣量20 μl；柱溫25 ℃；檢測器：二極管陣列檢測器(DAD)。理論塔板數按米格列醇峰計算應不低于1000。

2.2溶液制備

2.2.1供試品溶液 取本品，照溶出度測定法(《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅹ C第一法)，以水500 ml為溶劑，轉速為100 r/min，依法操作。經20 min時，取溶液適量，濾過(濾膜孔徑不得大于0.45 μm)，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.2對照品溶液 取經60 ℃減壓干燥至恒重的米格列醇對照品適量，精密稱定102.7 mg，置50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備溶液。精密量取溶液5 ml置于100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為對照品溶液。

2.2.3空白輔料溶液 依處方取不含米格列醇的空白輔料適量(約相當于50 mg的米格列醇處方量)置于500 ml溶出杯中，照“2.2.1”項下供試品溶液制備方法配制。

2.3專屬性試驗 分別依次取對照品溶液、供試品溶液和空白輔料溶液依上述色譜條件進樣分析，色譜圖見圖1，可見空白輔料不會干擾米格列醇的測定。

1. 米格列醇

2.4線性試驗 取“2.2.2”項下對照品儲備溶液，分別精密量取溶液1.0、3.0、5.0、7.0和9.0 ml，分置于100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，依法測定。以米格列醇峰面積對其濃度(μg/ml)進行線性回歸，回歸方程為：Y=7.23X+1.97(r=0.999 9)。結果表明：米格列醇在20.54～184.86 μg/ml濃度范圍內線性關系良好。

2.5精密度試驗 取“2.2.2”項下對照品溶液，依法連續進樣6次，結果米格列醇峰面積的RSD為0.082%(n=6)，說明進樣精密度良好。

2.6穩定性試驗 取“2.2.1”項下溶出度供試品溶液1份，依法分別于0、1、2、4、6和8 h后進樣分析，結果米格列醇峰面積的RSD為0.13%(n=6)，表明米格列醇溶液在8 h內穩定。

2.7回收率試驗 稱取經60 ℃減壓干燥至恒重的米格列醇對照品約30、40和50 mg，各6份，均精密稱定，分置于500 ml溶出杯中，并按處方比例分別加入輔料，分別依“2.2.1”和“2.2.2”項下方法制備回收率試驗溶液和對照品溶液，依法測定，計算回收率，結果平均回收率為99.4%，RSD為0.76%，見表1。

2.8定量限和檢測限試驗 精密稱取米格列醇對照品適量，用水溶解并稀釋制成一系列不同濃度的溶液，依法測定。當信噪比S/N=10±1時，米格列醇濃度為0.21 μg/ml，米格列醇的定量限為4.20 ng；當信噪比S/N=3±1時，米格列醇濃度為0.066 μg/ml，米格列醇的檢測限為1.32 ng。

表1 溶出度回收率試驗結果

2.9樣品檢查結果 取3批米格列醇片(批號081201、081202、081203)依法測定，結果3批樣品溶出量(占標示量)平均值分別為96.8%、95.6%和97.0%，均大于溶出限度75%，符合規定。

3 討論

經相關文獻檢索，目前世界主要藥典如USP、EP、BP等均無米格列醇及其制劑的檢測質量標準，而依國家藥監局批準的質量標準如前言所述情況無法正常檢測，原因可能是其流動相配制過程中用磷酸調pH值至4.0，導致在酸性環境中流動相中的酸與色譜柱固定相鍵合的氨丙基發生相互作用，使色譜柱柱效降低。同時，由于米格列醇結構式中N原子有孤對電子，易與酸性流動相中H+結合產生質子化，降低其色譜分配系數(K),從而縮短米格列醇在色譜柱固定相的保留行為，導致其較快流出(保留時間短)和分離情況較差。試驗曾應用0.01%氨水溶液(含5%乙腈)對氨丙基色譜柱進行再生，效果理想。由此聯想到在0.01 mol/L磷酸二氫銨溶液中滴加三乙胺調pH值至中性到弱堿性，試驗曾考查在0.01 mol/L磷酸二氫銨溶液中用三乙胺調pH值至6.0、6.5、7.0、7.5等不同pH值時米格列醇重復性試驗和分離度(R)情況,發現隨著pH值的不斷增加米格列醇重復性試驗和分離度(R)越來越好。這主要是因為隨著pH值的不斷增加，溶液逐漸由酸性變為弱堿性，抑制了米格列醇質子化而增大其色譜分配系數(K)，從而增加米格列醇在色譜柱固定相上的保留行為，提高了其色譜分離性能。同時，流動相的弱堿性亦阻止原標準流動相中的酸與色譜柱固定相鍵合的氨丙基發生相互作用，從而提高了氨丙基色譜柱的柱效，增加其色譜行為的穩定性。同時考慮到色譜柱pH的應用范圍(pH 2～8)，經反復試驗、不斷優化，最終確定本色譜條件。

新建立的本方法專屬性強、準確度高、重復性好，可用于米格列醇片的溶出度檢查方法。

1 黃雅琴,田成科.米格列醇片.中國新藥雜志,2005,14(5): 638