三種奧硝唑PLGA緩釋制劑體外釋放度的比較*

劉 霞

(南開大學附屬口腔醫院，天津 300041)

奧硝唑為一種繼甲硝唑、替硝唑之后的第三代新型硝基咪唑類衍生物，具有良好的抗厭氧菌作用，具有抗菌、鎮痛、消炎及促進潰瘍愈合作用。聚乳酸(PLA)是一種生物降解高分子材料，但存在親水性能差等不足缺點。因此，近年來使用各種PLA的親水改性研究日漸深入，尤其是利用羥基脂肪酸-乙醇酸(GA)合成共聚物聚(乳酸-乙醇酸，PLGA)的研究。牙周袋給藥系統是將制劑置于牙周袋中,藥物直接作用于靶器官(牙周組織)的一種制劑方式。藥物從固體制劑中釋放的速度和程度，在一定程度范圍內反應了藥物的吸收情況。通常采用的體外釋放度測定方法來反映牙周袋給藥系統的體內釋藥情況。為全面考查奧硝唑-PLGA緩釋制劑質量，本實驗對其釋放度的測定方法進行了探討，并對3種奧硝唑-PLGA緩釋制劑釋放度進行比較。

1 儀器與試藥

1.1儀器 AX200電子天平(日本島津公司)，W201F 型恒溫水浴鍋(上海申生科技有限公司)，DGG-101-2型電熱鼓風干燥箱(天津市天宇實驗儀器有限公司)，DZG-401型電熱真空干燥箱(天津市天宇實驗儀器有限公司)，HZS-H型水浴振蕩器(哈爾濱市東聯技術開發有限公司)，XS-212光學顯微鏡(南京江南光電股份有限公司)，2XZ-2型旋片式真空泵(浙江黃巖求精真空泵廠)，FINNPIPETTE型可調式移液器(上海熱電儀器有限公司)，FD-1型冷凍干燥機(北京博醫康實驗有限公司)，KDC-160HR高速冷凍離心機(科大創新股份有限公司中佳分公司)，UV-2450紫外分光光度計(蘇州島津工廠)，DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌儀(鞏義市英峪予華儀器廠)。

1.2試藥 奧硝唑(藥用，湖南九典制藥有限公司)，無水乙醇(分析純，天津市化學試劑六廠)，聚乙烯醇(PVA，1788，上海金樹脂粉末有限公司)，二氯甲烷(分析純，天津大學科威公司)，CMC-Na(藥用，淮南山河藥用輔料有限公司)，海藻酸鈉(分析純，上海天蓮精細化工有限公司)，淀粉(食用，天津中英保健食品有限公司)，PLGA (75∶25，Mw: 2200，自制)，磷酸二氫鉀(分析純，天津大學科威公司)，氫氧化鈉(分析純，天津大學科威公司), 純化水(分析純,天津市南開區純水供應站)。

2 實驗方法與結果

2.1奧硝唑緩釋微球、膜劑、棒劑的制備

2.1.1奧硝唑緩釋微球的制備——液中干燥法 PVA溶液的配制：精密稱取PVA 1.500 g放入錐形瓶，加50 ml純化水95 ℃電熱磁力攪拌加熱至全部溶解，得到濃度為3%的PVA溶液備用。

量取50ml上述已配制的PVA溶液(0.03 g/ml)放入200 ml的燒杯中備用，將400 mg PLGA溶解于10 ml有機溶媒二氯甲烷中，將奧硝唑加入上述有機相中，攪拌至溶解，將該乳液迅速加入到上述PVA水溶液中，以1 000 r/min攪拌30 min，再在室溫下以800 r/min的速度攪拌4 h，使二氯甲烷完全揮發，用純化水洗4～5次除去微球表面粘連的PVA及未被包封的奧硝唑，離心、凍干、收集微球。

2.1.2奧硝唑緩釋膜劑、棒劑的制備

2.1.2.1處方 奧硝唑0.15 g，羧甲基纖維素鈉0.30 g，海藻酸鈉0.20 g，淀粉0.15 g，PLGA 0.20 g，二氯甲烷0.50 ml，純化水適量。

2.1.2.2奧硝唑緩釋膜劑的配制方法 將海藻酸鈉加入10 ml純化水中充分溶脹得A液，將PLGA加入二氯甲烷中，40 ℃水浴加熱至溶解，待冷至室溫后加入CMC-Na、淀粉、奧硝唑即得B液，將A液加入B液中，充分攪拌，混勻，靜置。待氣泡除盡后涂膜，50 ℃干燥，脫膜，分割成所需大小的膜片(每片約含奧硝唑1 mg)，在紫外燈下照射15 min滅菌，密封包裝。

2.1.2.3奧硝唑緩釋棒劑的配制方法 按上述方法，將靜置后的溶液氣泡除盡后，加入20 ml針管中，擠出得棒狀物，50 ℃干燥，分割成所需大小的棒劑(每棒約含奧硝唑1 mg)，在紫外燈下照射15 min滅菌，密封包裝。

2.2奧硝唑含量測定方法的建立

2.2.1奧硝唑檢測波長的確定 配制濃度為0.02 mg/ml的奧硝唑溶液，在200～400 nm波長范圍內進行紫外吸收波長掃描，掃描結果見圖1。由圖1得出奧硝唑的紫外最大吸收波長是319 nm。

2.2.2干擾試驗 配制10 mg/ml PLGA的乙醇溶液，在200～400 nm波長范圍內進行紫外吸收波長掃描，掃描結果見圖2。由圖可看出該溶液在202 nm處有最大吸收，而在319 nm處無吸收，對奧硝唑的檢測無干擾。

圖1 奧硝唑紫外掃描圖譜

圖2 空白微球紫外掃描圖譜

2.2.3奧硝唑標準曲線的建立 精密稱取奧硝唑對照品 10 mg，用純化水溶解，在50 ml量瓶中定容，依次取100、250、375、500、750和1 000 μl至10 ml量瓶中，加入純化水定容,濃度分別為2.0、5.0、7.5、10.0、15.0和20.0 μg/ml，在319 nm處測吸收度，以濃度C對吸收度A做圖，并進行線性回歸。結果見表1。

表1 不同濃度奧硝唑的紫外吸收值

以奧硝唑濃度為橫坐標，319 nm處的吸光度為縱坐標可得回歸方程為：A=0.042 39C+0.111 93，r=0.999 91(n=6)，在319 nm處，奧硝唑的濃度C在2.0～20.0 μg/ml范圍內與吸光度A有良好的線性關系。

2.2.4回收率試驗 結果表明，平均回收率為(100.01±0.85)%，相對標準偏差<±5.0%，符合測定要求,見表2。

表2 回收率試驗結果

2.3PBS緩沖溶液的配制 精密稱取磷酸二氫鉀13.6 g，加入0.1 mol/L的氫氧化鈉790 ml中，用純化水稀釋至2 000 ml即得，備用。

2.4奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑體外釋放度的測定[1]采用恒溫振蕩法作制劑體外釋藥試驗[2]，分別稱取3批奧硝唑-PLGA微球、膜劑和棒劑各100 mg，每批包含3個樣品，放入27個不同的塑料套管中，分別加入1 ml緩沖鹽溶液，用密封膠封口，放入搖床中振蕩，溫度設為37 ℃，轉速為100 r/min, 分別在1、3、7、12、24、2和3 d等不同時間段取出塑料套管，離心，取出上清液，同時立即補加等量的緩沖液(pH 7.4)，樣品用紫外分光光度法在319 nm處測定吸光度，按回歸方程測定釋藥量，計算累積釋藥百分率，以累積釋藥百分率對時間作圖，釋放結果見表3。

表3 奧硝唑-PLGA制劑體外釋放結果(n=3)

2.5奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑釋放參數的比較 運用Excel[3]程序 計算奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑體外釋放參數m、T50、Td的值，結果見表4。

表4 奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑釋放參數比較

3 討論

本實驗采用紫外分光光度法測定3種奧硝唑-PLGA緩釋制劑的釋放度，具有操作簡便、靈敏度高、適用范圍廣和方法準確度好等特點。

實驗結果表明，3種奧硝唑-PLGA緩釋制劑的累積釋放百分率均在75%以上，符合國家藥品標準。總體上說，吸收速度受釋放速度限制的藥物，其生物利用度與釋放速度有較好的相關性。

本實驗根據奧硝唑-PLGA微球、膜劑、棒劑的釋放曲線計算出的T50和Td值與實際情況有所偏差，原因可能是釋放曲線是平滑的曲線，采用線性方法來計算，相關系數達不到標準，使得計算結果有誤差。推測對于釋放曲線更接近直線型的制劑則誤差較小。

綜上所述，該方法線性范圍寬，回收率高，溶液穩定性良好，可用于奧硝唑-PLGA制劑的釋放度分析。

1 周毅生，秦梅頌，咸銀庫，等.奧硝唑結腸定位腸溶片質量標準的研究.廣東藥學院學報，2007,23(6)：603

2 楊秀玲，張志清，董立. 阿昔洛韋白蛋白微球的制備及體外釋藥.中國藥學雜志，2000, 35(10): 676

3 方崇波.運用Excel程序快速計算片劑的溶出度參數.中國藥業，2006,15(18):41