漢族人群Megsin基因C-25663G多態(tài)性與IgA腎病的關(guān)系①

李露 張?zhí)煸?崔麗瓊

(解放軍第一醫(yī)院呼吸科 蘭州 730000)

IgA腎病在我國約占原發(fā)腎小球疾病的1/3,也是導(dǎo)致終末期腎病的常見病因之一,當(dāng)前認(rèn)為遺傳因素與該病的易感性有關(guān),并影響疾病的發(fā)生和發(fā)展。國內(nèi)學(xué)者在IgA腎病患者及其家庭成員中采用傳遞不平衡檢驗(yàn)(transmission disequili-brium test,TDT)和單倍體相對風(fēng)險(xiǎn)(haplotype relative risk,HRR)分析法對megsin基因3＇端非翻譯區(qū)的C-2180T區(qū)的基因多態(tài)性進(jìn)行分析研究后發(fā)現(xiàn),C-2180T區(qū)的等位基因明顯是由雜合親代傳向子代患者,且這個等位基因共同傳遞的比率明顯增加,說明megsin基因的變異性與IgA腎病發(fā)生的易感性相關(guān)［1］。本文用PCR-RFLP法及基因測序法鑒定基因型,采用病例對照研究的方法,探討了蘭州地區(qū)漢族人群IgA腎病中C-25663G基因多態(tài)性分子遺傳學(xué)意義。

圖1 1,2為CG雜合子;3為CC純合子;4為GG純合子;M為DAN標(biāo)準(zhǔn)分子量(DNA Marker)

1 對象與方法

1.1 對象

1.1.1 IgA腎病組 解放軍第一醫(yī)院心腎科經(jīng)皮腎穿刺活檢證實(shí)為IgA腎病的蘭州地區(qū)漢族的患者44例(男23例,女21例),年齡(10～49)歲,平均(32±5)歲。IgA腎病病理診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2001年全國腎活檢病理診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］。均排除繼發(fā)性腎臟疾病和其他合并癥及并發(fā)癥。

1.1.2 正常對照組 解放軍第一醫(yī)院100名(男72名,女28名)體檢正常的蘭州地區(qū)漢族健康人群,年齡(19～46)歲,平均(23±4)歲。

1.2 基因組DNA的提取

采用QIAamp (r)DNA試劑盒從EDTA抗凝200μL外周靜脈血中提取基因組DNA。

1.3 Megsin基因C-25663G基因鑒定

應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(poly-merase chain react ion-restrict ion fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法做基因型鑒定。上下游引物分別為5＇-GCT CAG ATA CAA TGG TGG CATA-3＇和5＇-GCT GAC ATT TGA GAG TTC CA-3＇(美國生命技術(shù)公司合成)。PCR反應(yīng)條件:95°C預(yù)變性15s,94°C變性30s,51退火15s,72°C延伸30s,共35個循環(huán),最后72°C延伸5min。PCR反應(yīng)體積為30μL。產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶Hinf I(Promega公司)37°C消化6h以上或過夜,2%瓊脂糖凝膠電泳確定基因型。

表1 IgA腎病患者C-2093T多態(tài)性分部與正常人群比較[例（%)]

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析經(jīng)遺傳平衡檢測證明,IgA腎病患者與對照組均符合Hardy-Weinberg平衡,具有群體代表性。應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。所有統(tǒng)計(jì)分析中,P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Megsin基因C-25663G基因鑒定

酶切后,等位基因CC型產(chǎn)生200、117bp2條片段;CG型產(chǎn)生317、200、117bp3條片段;GG型產(chǎn)生317bp1條片段,見圖1。

2.2 Megsin基因C-25663G基因多態(tài)性檢測結(jié)果

基因分布CC型者28例,CG型者12例,GG型者4例,等位基因C型68例,G型20例,與正常對照組基因分布相比,均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),見表1。

3 討論

我們以往的研究發(fā)現(xiàn),Megsin基因3＇端非翻譯區(qū)C-2093T和C-2180T多態(tài)性與中國漢族人群IgA腎病的發(fā)生顯著相關(guān)［3］。國內(nèi)學(xué)者應(yīng)用PCR-RFLP方法鑒定IgA腎病患者基因型,用以家庭為基礎(chǔ)的傳遞不平衡檢驗(yàn)(TDT)、單倍型相對危險(xiǎn)度(HRR)分析結(jié)合病例對照研究方法,首先分析Megsin基因C-25663G多態(tài)性與我國漢族人群IgA腎病發(fā)生的關(guān)系,結(jié)果顯示,Megsin基因C-25663G多態(tài)性與中國漢族人群IgA腎病的發(fā)生及病情進(jìn)展無關(guān)［4］。但由于基因多態(tài)性研究多受人群、地域、標(biāo)本量、研究方法等多方面影響,單一的研究結(jié)果無明顯的參考價(jià)值。

本研究用PCR-RFLP法鑒定基因型,采用病例對照研究的方法,探討蘭州地區(qū)漢族人群IgA腎病中C-25663G基因多態(tài)性分子遺傳學(xué)意義。研究結(jié)果顯示,IgA腎病基因分布CC型者28例(63.63%),CG型者12例(27.27%),GG型者4例(9.09%),等位基因C型68例(77.27%),T型20例(22.73%),與正常對照組基因分布相比,均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。研究結(jié)果提示Megsin基因C-2093T多態(tài)性與IgA腎病的發(fā)病可能無關(guān),此結(jié)果和夏運(yùn)風(fēng)教授研究結(jié)果相似,但這個研究結(jié)果對IgA腎病的發(fā)病機(jī)制、臨床用藥,以及未來基因監(jiān)測和基因治療將具有重要的指導(dǎo)意義。

[1]Li YJ,Du Y,Li CX,et al.Family- based association study showing that immunoglobul in A nephropathy is associated with the polymorphisms 2093C and 2180T in the 3＇untranslated region of the Megsin gene[J].J Am Soc Nephrol, 2004,15:1739～1743.

[2]全國腎活檢病理研討會.腎活檢病理診斷標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)意見[J].中華腎臟病志,2001,17:270.

[3]M iyata T,NangakuM,Su zuk iD,et al.A mesangium predominant gene,megsin,is a new serp in up regulated in IgA nephropathy[J].JC lin Invest,1998,102(4):828～836.

[4]Miyata T,Nangaku M,Suzuk iD,et al.Amesangium predominantgene,megsin,is a new serp in up regulated in IgA nephropathy[J].J Clin Invest,1998,102(1):828～836.