膀胱良、惡性上皮腫瘤中△Np63的表達(dá)及臨床意義

李勝水 許華 張鳳梅 李雙標(biāo) 劉巖 張霖

(河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科 河北滄州 061001)

p63是抑癌基因p53家族的新成員之一,包括TAp63和△Np632種異構(gòu)體。近年來研究顯示△Np63其在人膀胱癌、鼻咽癌、食管鱗狀細(xì)胞癌和卵巢癌中表達(dá)升高[1～4]。本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)染色方法檢測膀胱良、惡性上皮腫瘤中△Np63的表達(dá),并分析其與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系,旨在探討△Np63在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科2005年至2011年經(jīng)手術(shù)切除的有完整臨床資料的經(jīng)膀胱癌50例(包括41例膀胱尿路上皮癌和9例膀胱鱗狀細(xì)胞癌),膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤8例及膀胱切開取石術(shù)及開放前列腺切除患者的正常膀胱黏膜10例。膀胱癌病理分級按世界衛(wèi)生組織(WHO)1998年標(biāo)準(zhǔn)確定,低級別(0～1級)24例,高級別(II-III級)17例。臨床病理分期按國際抗癌聯(lián)盟TNM分期(UICC-TNM)標(biāo)準(zhǔn)確定,淺表性腫瘤(Tis-T1)22例,浸潤性腫瘤(T2-T4)19例。

1.2 主要試劑

鼠抗人△Np63單克隆抗體(濃縮液)(Santa Cruz公司)、S-P免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒(福州邁新生物技術(shù)有限公司)。

1.3 方法

一抗△Np63工作液配比為1∶200,采用SP法染色(按試劑盒說明書),DAB顯色。蘇木素復(fù)染。以已知食管鱗狀細(xì)胞癌組織做陽性對照,以PBS代替一抗做為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定

由兩位病理科醫(yī)生在臨床和病理資料不知曉的情況下進(jìn)行觀察,兩位觀察者重復(fù)觀察同一張病理切片并進(jìn)行結(jié)果判定。光鏡下△Np63定位于細(xì)胞核,陽性染色為棕黃色顆粒。隨機(jī)選擇5個高倍視野,計(jì)數(shù)500個腫瘤細(xì)胞中陽性著色的細(xì)胞數(shù),陽性表達(dá)率(PI)=(陽性表達(dá)腫瘤細(xì)胞數(shù)/500)X100%,PI＜25%為陰性,PI≥25%為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,△Np63在各組中的表達(dá)及與膀胱癌臨床分期、病理分級的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn),P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膀胱良、惡性上皮腫瘤中△Np63的表達(dá)

△Np63在正常膀胱黏膜、膀胱內(nèi)翻性乳頭狀瘤及膀胱癌組織中的陽性表達(dá)率分別為10.00%(1/10)、37.50%(3/8)和80.00%(40/50)。膀胱癌組織中△Np63表達(dá)顯著高于兩對照組(P＜0.05),見表1。

2.2 △Np63的表達(dá)與膀胱尿路上皮癌病理分級、臨床分期的關(guān)系

膀胱高級別尿路上皮癌組織中△Np63的陽性表達(dá)率為94.12%(16/17),顯著高于低級別組66.67%(16/24);隨著浸潤程度的增加,△Np63的陽性著色強(qiáng)度增強(qiáng),陽性表達(dá)率亦升高(P＜0.05),見表2。

2.3 △Np63在膀胱尿路上皮癌與鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)

9例膀胱鱗狀細(xì)胞癌組織中△Np63陽性表達(dá)率為88.89%(8/9),高于膀胱尿路上皮癌組78.05%(32/41),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),見表3。

3 討論

表1 膀胱良、惡性上皮腫瘤中△Np63的表達(dá)[例(%)]

表2 不同病理分級、臨床分期膀胱尿路上皮癌組織中△Np63的表達(dá)

表3 膀胱尿路上皮癌與鱗狀細(xì)胞癌組織中△Np63的表達(dá)[例(%)]

p63是腫瘤抑制基因p53家族的一個新成員,該基因定位于染色體3q27～3q29區(qū),包含15個外顯子,2個獨(dú)立的啟動子。研究發(fā)現(xiàn)在哺乳動物中p63對于胚胎外胚層發(fā)育,上皮干細(xì)胞的增生、生長,上皮組織的發(fā)育、分化和形態(tài)發(fā)生均具有重要的意義。主要有TAp63和△Np632種亞型。其中,沒有反式激活域的亞型△Np63不能激活下游基因,以顯性失活的方式促進(jìn)腫瘤的發(fā)生,是p63在腫瘤中的主要表達(dá)形式[5]。關(guān)于p63在膀胱腫瘤中發(fā)揮的作用,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為△Np63隨腫瘤惡性程度增加表達(dá)增加,主要充當(dāng)致癌基因。Park等[6]應(yīng)用RT-PCR方法檢測發(fā)現(xiàn)正常膀胱組織中△Np63檢測不到或極低,而47例膀胱癌中呈異常過量表達(dá)。殷舞等[7]在mRNA水平檢測發(fā)現(xiàn)膀胱尿路上皮癌中以△Np63為主,且其表達(dá)的減少與膀胱尿路上皮癌的病理分級密切相關(guān)。谷化平等[8]的研究發(fā)現(xiàn)隨著尿路上皮癌的病理分級和臨床分期增高、腫瘤復(fù)發(fā)以及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,p63蛋白表達(dá)的強(qiáng)陽性率隨之顯著增高(P＜0.05)。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,膀胱癌組織中△Np63表達(dá)陽性率為80.00%,陽性細(xì)胞呈彌漫性分布,且主要為強(qiáng)陽性表達(dá),顯著高于膀胱良性腫瘤及正常尿路上皮,表明p63蛋白主要存在于正在增殖或具有增殖能力的膀胱尿路上皮細(xì)胞中,與尿路上皮癌細(xì)胞的增殖、惡性轉(zhuǎn)化以及癌細(xì)胞的惡性程度密切相關(guān)。此外,與已報道文獻(xiàn)一致[9],我們發(fā)現(xiàn)隨著病理分級和臨床分期的升高,△Np63的陽性表達(dá)率亦隨之升高。Urist等[10]的研究發(fā)現(xiàn)膀胱鱗狀細(xì)胞癌△Np63亞型持續(xù)高表達(dá),伴幼稚細(xì)胞增多,推測△Np63可能通過抑制細(xì)胞分化成熟而促進(jìn)腫瘤發(fā)生。我們的實(shí)驗(yàn)中收集到的9例膀胱鱗狀上皮癌中有8例△Np63呈陽性表達(dá),陽性率高于尿路上皮癌組,但因病例數(shù)量有限、樣本例數(shù)相差較多而尚未發(fā)現(xiàn)顯著差異。

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是受因素影響,涉及眾多基因及因子調(diào)控的復(fù)雜過程。△Np63在膀胱腫瘤中所扮演角色,以及是否有與其相關(guān)的其它生物學(xué)指標(biāo)與之協(xié)同發(fā)揮作用仍是目前研究的熱點(diǎn)[8,11]伍季等[9]的研究表明,△Np63與VEGF呈正相關(guān),前者可能通過促進(jìn)腫瘤血管生成發(fā)揮促癌作用;后續(xù)研究顯示[12]△Np63與p53、Ki-67在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)呈正相關(guān),△Np63通過抑制p53基因功能和促進(jìn)細(xì)胞增殖發(fā)揮一定的促癌作用。當(dāng)三者均出現(xiàn)高表達(dá)時,提示膀胱癌預(yù)后不良。總之,△Np63在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用,其高表達(dá)預(yù)示級別升高及更具侵襲性的生物學(xué)行為,并提示不良預(yù)后,進(jìn)一步研究△Np63及其他促進(jìn)或抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)指標(biāo)的關(guān)系,將對深入闡明膀胱腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制、基因治療和改善預(yù)后具有重要意義。

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