鹽酸昂丹司瓊口崩片在健康人體內(nèi)的藥動學(xué)及生物等效性研究

邸東華，劉 茜，趙 輝，王 茜

昂丹司瓊(Ondansetron)是一種高度選擇性的5-羥色胺(5-HT3)受體拮抗劑，能抑制由化療和放療引起的惡心嘔吐［1-3］。本文參考國內(nèi)外文獻(xiàn)方法［4-5］，應(yīng)用HPLC-UV法測定20名健康男性志愿者口服鹽酸昂丹司瓊口腔崩解片后各時間點的血藥濃度，計算藥物動力學(xué)參數(shù)，以普通片作為參比制劑，計算相對生物利用度，并判斷是否生物等效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10ATvp泵，SPD-6AV紫外可見檢測器(日本島津公司);TGL-16G型離心沉淀機(上海安亭科學(xué)儀器廠);XW-80型渦旋混合器(上海手術(shù)器械廠)。

1.2 受試制劑 鹽酸昂丹司瓊口崩片(北京雙吉制藥有限公司，規(guī)格:4 mg);參比制劑:樞丹(鹽酸昂丹司瓊片，寧波市天衡制藥有限公司，規(guī)格:4 mg);對照品昂丹司瓊(由北京雙吉制藥有限公司提供，含量:99.7%)、鹽酸格拉司瓊(Granisetron)、對照品格拉司瓊(由江西弘益藥業(yè)有限公司提供，含量99.6%)。乙腈為色譜純，三乙胺、磷酸為分析純，水為雙重蒸餾水，空白血漿由沈陽軍區(qū)總醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 給藥方案與樣品采集［6］選擇20名健康男性志愿受試者，年齡19～23歲，體重55～80 kg，經(jīng)全面體檢正常，血常規(guī)、肝腎功能及心電圖檢查均正常。受試者無繼往病史和藥物過敏史，不吸煙，不嗜酒，試驗前2周內(nèi)未用任何藥物，試驗前均簽署知情同意書，并經(jīng)倫理委員會審批同意。隨機分為2組。試驗前禁食10 h，試驗當(dāng)日清晨空腹給藥8 mg。一組口服參比制劑，另一組口服受試制劑。參比制劑用200mL溫開水送服;受試制劑口腔含化，并記錄崩解時間。隔周交叉。于口服給藥前(0 h)和給藥后 0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、15 h，由肘正中靜脈取血5mL，并立即移入經(jīng)肝素處理的離心試管中，離心5min(3000 r/min)，分離血漿，于－20℃冰箱中保存待測。

2.2 色譜條件 色譜柱:DiamonsilTMC18柱(200mm ×4.6mm，5μm);流動相:磷酸緩沖液(pH 4.0)∶乙腈(80∶20);流速:1.0mL/min;檢測波長:302 nm;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:20μL。

2.3 溶液配制

2.3.1 鹽酸昂丹司瓊對照品溶液 精密稱取鹽酸昂丹司瓊對照品適量，加甲醇溶解并稀釋，得昂丹司瓊濃度為2000 ng/mL的對照品貯備液。精密量取適量，用甲醇稀釋成濃度分別為20、50、100、200、400、800、1600 ng/mL 的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.2 鹽酸格拉司瓊內(nèi)標(biāo)溶液 精密稱取鹽酸格拉司瓊對照品適量，加甲醇溶解并稀釋，得昂丹司瓊濃度為500 ng/mL的對照品貯備液。精密量取適量，用甲醇稀釋為50 ng/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.4 血漿樣品預(yù)處理 取血漿1.0mL，加入乙酸乙酯3mL，渦旋3min，離心5min(10000 r/min)，取上層有機相置另一試管中，氮氣流下(30℃)吹干，殘渣加甲醇50μL溶解，進(jìn)樣 20μL。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取人空白血漿500μL，各加入“2.4”項昂丹司瓊標(biāo)準(zhǔn)系列溶液50μL，格拉司瓊內(nèi)標(biāo)溶液50μL，制成相當(dāng)于昂丹司瓊濃度為2.0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 ng/mL 的模擬血漿樣品。按“2.5”項下方法處理后，進(jìn)樣測定。以濃度C為橫坐標(biāo)、相應(yīng)峰面積比值A(chǔ)s/Ai為縱坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運算。得回歸方程:Y=0.946 X+0.027，r=0.9952。表明在2.0～160 ng/mL濃度范圍內(nèi)，昂丹司瓊濃度與其峰面積比值線性關(guān)系良好，定量下限為2.0 ng/mL。

空白血漿、空白血漿加鹽酸昂丹司瓊(10.0 ng/mL)、受試者服藥1.5 h后血漿樣品的色譜圖見圖1。圖1顯示，昂丹司瓊、格拉司瓊的保留時間分別為5.7、6.7min，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測定。

圖1 色譜圖

2.6 準(zhǔn)確度與精密度 取空白血漿及對照品溶液，按“2.5”項下的方法配制低、中、高濃度的質(zhì)量控制(QC)樣品，分別進(jìn)行6樣本分析。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算QC樣品的測得濃度，回收率分別為90.2%、106.2%和97.4%，日內(nèi)、日間精密度為2.05%～13.5%。

2.7 提取回收率 按“2.6”項下方法配制低、中、高(5.0、20.0、120.0 ng/mL)濃度的質(zhì)控樣品，分別進(jìn)行6樣本分析。另取空白血漿按“2.5”項下操作，配制成相應(yīng)濃度，進(jìn)樣分析。以提取后與未經(jīng)提取直接進(jìn)樣獲得的色譜圖峰面積的比值，考察樣品的提取回收率。得出提取回收率分別為64.5%、68.0%和 68.9%，內(nèi)標(biāo)提取回收率為68.5%。

2.8 穩(wěn)定性考察 按“2.6”項下方法配制低、中、高(5.0、20.0和120.0 ng/mL)濃度的質(zhì)控樣品，分別于－20℃保存20 d，血漿樣品經(jīng)歷2次冷凍-解凍循環(huán)處理后，樣品室溫放置24 h均穩(wěn)定。

2.9 藥動學(xué)研究 20名健康受試者口服受試制劑和參比制劑8 mg，平均血藥濃度-時間曲線見圖2。

圖2 20名受試者口服受試制劑和參比制劑后的平均血藥濃度-時間曲線

將主要藥物動力學(xué)參數(shù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，結(jié)果受試制劑的AUC0-t和AUC0-∞均拒絕不等效假設(shè)，表明受試制劑與參比制劑在體內(nèi)具有生物等效性。見表1。

表1 20名健康受試者口服2種制劑后的主要藥動學(xué)參數(shù)

3 討論

研究表明，昂丹司瓊體內(nèi)藥物濃度較低，選擇一種靈敏度高、干擾小的提取方法至關(guān)重要［1］。有研究者采用固相萃取，但方法繁瑣［2-3］;另有學(xué)者采用蛋白沉淀法，但揮干速度較慢［2］。本文采用有機溶劑萃取法，用乙酸乙酯進(jìn)行提取，效果良好。鹽酸格拉司瓊與昂丹司瓊結(jié)構(gòu)相近，二者在整個色譜分析中的行為具有可比性，且在本色譜條件下有較好的分離度。應(yīng)用鹽酸格拉司瓊作為內(nèi)標(biāo)，使分析方法更精確、重現(xiàn)性更好。

本研究結(jié)果表明，昂丹司瓊口服給藥后，約1.5 h血藥濃度達(dá)峰。兩種制劑生物等效。給藥期間，20名健康受試者口服鹽酸昂丹司瓊8 mg后，未見任何不良反應(yīng)發(fā)生，且其藥動學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)報道［1］基本一致。本研究分析方法快速、準(zhǔn)確、簡單，分析時間適中，完全不受雜質(zhì)干擾，且峰形良好，適合鹽酸昂丹司瓊制劑的藥動學(xué)研究。

［1］汪楊，吳偉，黃敏，等.鹽酸昂丹司瓊口崩片與普通片的生物等效性研究［J］.復(fù)旦學(xué)報，2005，32(1):55-58.

［2］沈于蘭，馮芳.大鼠體內(nèi)恩丹西酮與氯丙嗪的藥動學(xué)相互作用研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2008，43(10):771-775.

［3］沈于蘭，馮芳，孫奇.HPLC-MS研究鹽酸恩丹西酮緩釋膠囊人體藥動學(xué)及生物等效性［J］.中國藥學(xué)雜志，2007，42(17):1333-1336.

［4］高潔.反相高效液相色譜法測定昂丹司瓊的血藥濃度藥物研究［J］.藥物研究，2009，18(15):17-18.

［5］吳燕，李華龍，米亞嫻，等.鹽酸昂丹司瓊口服溶液的人體藥代動力學(xué)和生物等效性研究［J］.藥物分析雜志，2009，29(2):233-235.

［6］國家藥典委員會.中國藥典［S］.二部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:附錄 XIXB，173.