腸桿菌科細菌生化鑒定系統的研制及評價分析

王麗娟

（湖南省邵陽市中西醫結合醫院 湖南邵陽 422000）

腸桿菌科細菌包括一大群生物性狀相似的革蘭陰性無芽胞桿菌,其中部分為致病菌,如:沙門菌屬、志賀菌屬等。腸桿菌科的分類主要根據生化反應和抗原構造,按照Bergery分類法,分為5個族、12個屬。臨床上常采用抗生素濃度梯度法(E-test法)結合K-B法藥敏試驗,根據美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)文件標準進行抗生素敏感性判斷[1]。我院以伯杰細菌鑒定手冊[2]為參考,以腸桿菌科細菌生化反應陽性概率為依據并結合編碼技術[3],準確、快速、方便地鑒定腸桿菌科細菌,下面就此系統分析報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

菌種以臨床標本中分離的腸桿菌科細菌120株,以聚苯乙烯塑料板孔容量0.4mL)、胰蛋白胨、蛋白月示、酵母粉為材料及原料。

1.2 方法

1.2.1 生化反應項目組合 大部分由生物堿、苷和糖組成,為苯丙氨酸(PD)、V—P、吲哚(IND)、精氨酸(ADH)、賴氨酸(IDC)、鳥氨酸(ODC)、尿素(uRE)、丙二酸鹽(MAI)、七葉苷(ESC)、甘露醇(MAN)、山梨醇(SOR)、肌醇(IN0)、側金盞花醇(AD0)、鼠李糖(RHA)、蔗糖(SAC)等20項組成。

1.2.2 生化基質配方 結合經典配方及原料來源、反應速度、穩定性、顏色對比度等因素,采用正交試驗的矩陣方法研制,部分生化基質配方如下:V－P:酵母粉1g、丙酮酸鈉0.5g、葡萄糖10g、肌酸0.5g、氯化錳25mg、pH6.0、PD酵母粉0.5g,I－苯丙氨酸1g,pH8.4。

1.2.3 制備鑒定條 上述20種生化基質配制后進行115℃15min滅菌,分別加入聚苯乙烯板中,葡萄糖和硝酸鹽為復合配方合用一孔,置于50℃干燥箱中脫水制干,封口4℃貯存。

1.3 性能檢測

采用雙盲法,用本系統和API同時鑒定120株臨床菌株,以檢測本系統鑒定結果的準確性。用已知典型生化反應的腸桿菌、肺炎克雷伯菌、宋內志賀菌,每株重復鑒定30次,驗證其重復性及標本間差異。

1.4 統計學方法

采用卡方進行檢驗,且以P<0.05為有統計學意義。

2 結果(表1）

由表1得出:本系統與API兩種方法鑒定至屬水平的符合率為95%,經檢驗兩者間無顯著性差異(P>0.05)（表2）。

表1 2種方法鑒定120株臨床菌株結果

表2 11株標準菌株在不同時間檢測結果的符合率

由表2得出:將11株標準菌株接種于本系統,8～24h的觀察結果符合率為92.4%～98.6%。

3 討論

腸桿菌科細菌為革蘭陰性桿菌,兩端鈍圓,無芽胞。為需氧和兼性厭氧菌,營養要求不高,在普通培養基上生長良好。不同菌屬的生化反應甚不一致,可作為腸桿菌科細菌鑒定的依據之一。

細菌鑒定的準確是臨床治療的依據。以往的方法多操作復雜、時間長。我院自制的本生化鑒定系統,充分考慮到材料來源、鑒定價值、基質穩定性這幾項因素,并結合反應速度、穩定性、顏色對比度等內容。本組數據中,11株標準菌株接種于本系統,8～24h的觀察結果符合率為92.4%～98.6%。本系統鑒定至屬水平符合率為95%。

實踐得出,該方法操作簡便、反應速度快、容易判定。本技術關鍵在于鑒定條制備,將生化基質置聚苯乙烯條中低溫脫水制干,使用時只需加入菌液,操作方便。為了生化反應的穩定性,在精氨酸、賴氨酸、尿液基質配方中加入了少量葡萄糖防止其它原因使基質分解而產生假陽性。

綜上,新研制系統鑒定腸桿菌科細菌快速、簡單,能很好的為臨床提供準確實驗依據。

[1]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testin[S].Wayne PA:National Committee for Clinical Laboratory Standards,2001,M100～S11.

[2]趙貴明,陳彥長,李瑾.腸桿菌科細菌微量快速生化鑒定系統的研制[J].中國衛生檢驗雜志,2004,14(2):142～144.

[3]王禮文,張莉,張立.革蘭陰性細菌編碼系統(GN-27)對腸桿菌科細菌的鑒定評價[J].中國衛生檢驗雜志,2005,15(6):679～681.