葛芩顆粒質量標準研究

張珮 竇建衛 郭永逵

葛芩顆粒由金銀花、葛根、黃芩、野菊花、甘草等七味藥材組成的制劑，具有辛涼解表、清熱解毒的功能，主治感冒及流行性感冒。為控制藥品質量,保證臨床用藥的安全性和有效性,本文研究探索用薄層色譜法(TLC)鑒別處方中葛根、黃芩和野菊花三味藥材的方法，并用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)對制劑中葛根所含的葛根素進行測定,為葛芩顆粒的質量標準提供定性和定量檢測方法。

1 儀器和試藥

Lab Alliance 高效液相色譜儀，N3000色譜工作站、超聲波清洗機(天津市東康科技有限公司)、YP1201N型分析天平(上海天平儀器廠)。葛根素對照品(批號110752-200209)、黃芩對照藥材(批號120955-200406)、蒙花苷對照品(批號111528-200303)，均購于中國藥品生物制品檢驗所；葛芩顆粒(自制)；乙腈(色譜純)；水為重蒸餾水；其余試劑均為分析純。

2 薄層鑒別

2.1 葛根的薄層鑒別

取以上3批顆粒劑研細,約稱10 g，加甲醇20 ml超聲提取20分鐘，濾過，濾液蒸至1 ml作為供試品溶液。另取葛根素對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺葛根的陰性樣品10 g，同法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法試驗，分別吸取上述三種溶液各6 μL，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(7∶2.5∶0.25)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色熒光斑點，陰性無干擾(見圖1)。

圖1 葛根TLC圖譜

2.2 黃芩的薄層鑒別

取以上3批顆粒劑研細,約稱10 g，加乙酸乙酯—甲醇(3∶1)的混合溶液30 ml加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩對照藥材1 g，和缺黃芩的陰性樣品10 g，同法制成陰性樣品溶液。分別吸取上述三種溶液各6 μl，點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯—甲酸—水(7∶4∶3)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點，陰性無干擾(見圖2)。

圖2 黃芩TLC圖譜

2.3 野菊花的薄層鑒別

取以上三批顆粒劑研細，約稱10 g，加甲醇20 ml超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為供試品溶液。另取蒙花苷對照品，加甲醇制成每1 ml含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺野菊花的陰性樣品10 g，同法制成陰性樣品溶液。吸取上述三種溶液各6 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁溶液，熱風吹干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色熒光斑點，陰性無干擾(見圖3)。

圖3 野菊花TLC圖譜

3 葛根素的含量測定

3.1 色譜條件

色譜柱：C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：甲醇—水(25:75)；檢測波長：250 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：常溫；理論板數按葛根素峰計算應不低于4 000。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取葛根素適量加30%乙醇制成每1 ml含葛根素0.276 mg的溶液，搖勻，即得。

3.3 供試品溶液的制備

取葛芩顆粒適量，研細，稱取1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇30 ml，稱定重量，超聲處理30分鐘,取出，放冷,再稱定重量，并補足減失的重量,搖勻,濾過，取續濾液過0.45 μm 微孔濾膜,即得。

3.4 陰性對照溶液的制備

按處方中藥味比例，自配不含葛根的群藥，按其工藝制成陰性樣品,按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

3.5 方法專屬性

取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液，在上述色譜條件下，各進樣10 μl，測得HPLC圖譜，見圖4。結果表明陰性樣品無干擾。

3.6 線性關系考察

精密量取葛根素對照品溶液(0.276 mg/ml)0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，分別置6個25 ml的量瓶中，加30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μl，按上述色譜條件測定,以葛根素峰面積為縱坐標,葛根素進樣量(μg)為橫坐標,繪制標準曲線圖。經計算得回歸方程：Y=7 724X+2 909.6，r=0.999 7，結果表明葛根素在5.52～55.2 μg間線性關系良好。

圖4 葛芩顆粒 HPLC 色譜圖

3.7 精密度試驗

精密吸取葛根素對照品溶液10 μl,連續進樣6次，測定峰面積RSD為0.78%，表明儀器精密度良好。

3.8 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，在上述色譜條件下，于配制后的0、1、2、4、8、12、24小時進樣，測定峰面積，計算RSD=1.78%，可見供試品溶液在24小時內基本穩定。

3.9 重復性試驗

取同一批樣品各6份，按供試品制備與測定方法進行此樣品溶液的制備并測得葛根素的RSD為0.73%。表明重復性良好。

3.10 回收率試驗

取已知含量的同一批樣品0.5 g，共5份,分別加入葛根素對照品適量，按供試品溶液制備方法制備及測定，結果見表1。

3.11 樣品含量測定

取葛根顆粒3個批號的樣品，按上述供試品溶液的制備方法和測定條件，測定其中的葛根素含量分別為2.27、2.35、2.13 mg/g。

表1 加樣回收率試驗結果(n=5)

4 討論

顆粒劑指將藥物粉末與適宜的輔料混合而制成的有一定粒度的干燥顆粒狀制劑。顆粒劑既可直接吞服，又可沖入水中飲服，方便患者攜帶，且滿足現代制劑質量可控，便于機械化生產的需求[1]。薄層色譜法一直以來以操作簡便、精密度高、重現性好，在質量控制中受到重視[2-4]。

葛芩顆粒處方中的藥味多，成分復雜，故薄層鑒別有較大困難，通過參閱文獻并對各個藥味的研究，得出薄層效果較好的葛根、黃芩、野菊花。在黃芩的定性鑒別中,曾參考藥典方法[5]，采用甲苯—乙酸乙酯—甲醇—甲酸(10∶3∶1∶2)為展開劑，但斑點分離效果不理想。經過調節以乙酸丁酯—甲酸—水(7∶4∶3)的上層溶液為展開劑，再噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，總體分離效果較好。在野菊花的鑒別中,藥典[5]記載的展開系統分離效果不理想，調整后確定為系統乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5∶3∶1∶1)為展開劑，再噴以2%三氯化鋁溶液，薄層色譜斑點清晰、分離度好。

葛根作為葛芩顆粒中主藥之一，投料量大，葛根中主要含黃酮類化合物，其中葛根素的含量較高而且穩定，故選其作為控制本品質量的指標。在樣品前處理中對提取方法做了考察，結果用30%乙醇超聲提取30分鐘的方法提取葛根中葛根素，簡單快捷，提取率較高。對精密度、穩定性、重復性和回收率進行了考察，表明此方法可靠，準確性好，簡便易于操作，可很好的控制葛芩顆粒的質量。

[1] 崔福德.藥劑學[M].北京：人民衛生出版社,2007:122．

[2] 鄭修麗，王炯.清熱逐風合劑的薄層色譜鑒別[J].甘肅中醫，2001，14(6)：65.

[3] 夏曦，劉玲. 舒筋通絡外用顆粒質量標準的研究[J].中國醫藥導報，2010，7(28)：38-41.

[4] 徐曉弘，熊鑫.薄層色譜法鑒別冠脈寧顆粒的研究[J].中國醫藥導報，2011，8(15)：183-184.

[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學工業出版社，2010：313,1212,1075.