三花膏質(zhì)量控制標準研究

劉秀英，黃 平

(江西省南昌市洪都中醫(yī)院藥劑科，江西南昌 330008)

三花膏是我院自制中藥制劑，由金銀花、野菊花、木芙蓉花組成，具有清熱解毒、軟堅散結(jié)、消腫的作用，用于癰疽、疔癤、乳癰及無名腫毒。為確保三花膏質(zhì)量，我們對其質(zhì)量控制標準進行了研究，總結(jié)如下。

1 材料

北京高效液相色譜儀，Q/BKYY31-2000電熱恒溫干燥箱，瑞士Precisa電子天平(XR205SM-DR)，CX-100型超聲波清洗機(中國北京市醫(yī)療設(shè)備二廠)，DKS-12型不銹鋼新型電熱恒溫水浴鍋(上海經(jīng)濟區(qū)沈蕩中新電器廠)。

綠原酸對照品(批號0873-9914)、蒙花甙對照品(批號0891-9910)、野菊花對照藥材(批號121164-2007101)，均為中國藥品生物制品檢定所提供。

甲醇為色譜純，水為純化水，試劑均為分析純。

三花膏(南昌市洪都中醫(yī)院制劑中心，批號100108，100227，100322)。

2 薄層色譜鑒別

金銀花:取本品25g，加乙酸乙酯15mL，置水浴上加熱回流1h，提取2次，合并乙酸乙酯液，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試照品溶液。另取綠原酸對照品，加甲醇制成1mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[1]分別吸取上述溶液各10μL、2μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(14∶5∶5)的上層溶液為展開劑展開，取出晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇液，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與金銀花對照藥材液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點。而陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上不顯相同的熒光斑點。

野菊花:取本品25g，加石油醚(60～90℃)5mL，置50℃水浴中溫浸15min，時時振搖，傾去上清液，藥渣再用石油醚同法處理1次，棄去石油醚液，藥渣揮盡溶劑，加甲醇20mL，在60℃水浴中浸漬15min，時時振搖，放冷，濾過，濾液作為供試照品溶液。另取野菊花對照藥材0.2g，加石油醚(60～90℃)10mL，置50℃水浴中溫浸30min，棄去石油醚液，藥渣揮盡溶劑，加甲醇10mL，加熱回流30min，放冷，濾過，濾液作為對照藥材溶液。再取蒙花甙對照品，加甲醇制成0.2 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[1]分別吸取上述溶液各3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑展開，取出晾干，噴以2%三氯化鋁試液，略加熱至干置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材液色譜和對照品色譜相應(yīng)位置上分別顯相同顏色的熒光斑點。

3 綠原酸含量測定

色譜條件:色譜柱為DikmaKromasilC18(250mm×4.6 mm，5μm)，流動相為乙腈 -0.4% 磷酸溶液(12∶88)，流速0.8mL/min，柱溫 30℃，檢測波長326nm。

對照品溶液的制備:取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的綠原酸對照品4.0mg，精密稱定，置50mL棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每毫升含綠原酸80μg)。

供試品溶液的制備:取本品適量，研勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密取續(xù)濾液5mL，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

系統(tǒng)適應(yīng)性實驗:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。得出綠原酸的保留時間約為10min，綠原酸峰與其前后色譜峰的分離度分別為 12.60，3.34，均大于 1.5，拖尾因子為1.03，理論塔板數(shù)以綠原酸峰計為15417，綠原酸峰純度因子為1000。

線性關(guān)系考察:分別精密吸取綠原酸對照品溶液(80μg/mL)2，4，6，8，10，15，20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積A對進樣量C(μg)進行回歸，得標準曲線方程:A=34.8152C+0.2685，r=0.9999。結(jié)果表明，綠原酸在0.16～1.6μg范圍內(nèi)，峰面積與進樣量有良好的線性關(guān)系。

精密度實驗:精密吸取同一供試品溶液10μL，按上述色譜條件連續(xù)進樣5次，測得綠原酸峰面積RSD為0.46%。表明儀器精密度良好。

重復性實驗:取同一批號(100322)本品，按供試品溶液制備方法制得5份供試品溶液，分別精密進樣測定，測得綠原酸的平均含量為3.2692%，RSD為0.82%。表明本方法重復性良好。

穩(wěn)定性實驗:取同一批號(100108)本品供試品溶液，分別于制備后0，2，4，6，8，10，12，24，36h 精密進樣 10μL，測得綠原酸的平均含量0.507mg/支，RSD為1.54%，表明供試品溶液在36h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收實驗精密稱取已知含量(3.2692%)的三花膏(批號100322)5份，每份約0.5g，分別精密添加綠原酸對照品溶液(4.108mg/mL)3mL、4mL、5mL，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，并計算回收率。結(jié)果見表1。實驗結(jié)果表明，本法具有良好的回收率。樣品測定分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，以外標法計算樣品中綠原酸的含量。結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率實驗測定結(jié)果 (n=5)

表2 3批樣品測定結(jié)果 (n=3)

4 討論

金銀花清熱解毒、疏散風熱，用于治療癰腫、疔瘡、丹毒、溫病發(fā)熱，為君藥;野菊花清熱解毒消腫，用于治療疔瘡癰腫、丹毒，能增強君藥解毒消腫作用，為臣藥;木芙蓉花清熱解毒消腫，用于治療癰腫、疔瘡。經(jīng)過20余年的臨床應(yīng)用，證實其對癰疽、疔癤、乳癰及無名腫毒有獨特的療效，未見不良反應(yīng)。

通過分析，找出了金銀花、野菊花2種具有專屬性成分的藥材做為質(zhì)量標準中鑒別的試驗對象，可通過控制金銀花、野菊花來控制全方的質(zhì)量。

[1]國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部[M].北京:化學工業(yè)出版社，2005.471，596，附錄31.