氣相色譜法分析蒙藥白頭翁多糖的單糖組分

2011-06-12 03:58:18徐秀廷趙玉英顧德昌

武漢工程大學學報 2011年7期

徐秀廷，趙玉英，顧德昌

(1. 內蒙古民族大學化學化工學院，內蒙古通遼 028043；2. 內蒙古民族大學分析測試中心，內蒙古通遼 028043)

0 引言

白頭翁Pulsatilla chinensis(Bunge) 是中蒙醫常用藥材，具有清熱解毒、涼血止痢、燥濕殺蟲的功效,臨床上用于治療細菌性痢疾、阿米巴痢疾、婦科陰道炎等，白頭翁以及藥物植物化學成分的研究較多[1-4]，多糖是醛糖和酮糖通過糖苷縮合而成的天然多聚體，廣泛存在于高等植物、海藻和微生物中.多糖具有提高免疫力、降血糖、抗凝血、抗輻射、抗腫瘤、抗衰老等多種生物功能，且對機體毒副作用小,是生命有機體必不可少的成分,因此對其研究有著重要的現實意義.白頭翁多糖含量的研究已有報道[5]，但其組分的研究未見報道.本實驗用乙酰化法將多糖水解并進行衍生化，采用氣相色譜法分析多糖中各種單糖的種類和組成，為將白頭翁開發成為多糖資源和豐富我國多糖資源的植物來源提供實驗依據.

1 實驗器材

1.1 儀器

TRACE GC氣相色譜儀(Thermo)，Thermo TR-5ms色譜柱，氮氣、氫氣純度均為99.999%，全自動空氣源(北京中惠普分析技術研究所)，旋轉蒸發儀(上海申生科技有限公司).

1.2 試劑

葡萄糖、肌醇、D-半乳糖、甘露糖、鼠李糖、D-阿拉伯糖和D-木糖均為進口分裝，硼氫化鈉、甲基咪唑、氨水、無水乙醇等均為分析純.

1.3 材料

蒙藥白頭翁多糖由內蒙古民族大學應用化學研究所提供.

2 白頭翁多糖的組分分析

2.1 各種單糖對照品的制備

精密稱取木糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖約各2 mg配成1 mg·mL-1的混合糖液，再配制肌醇1 mg·mL-1溶液，量取混合糖液0.2 mL，依次加入質量分數為28%濃氨水0.05 mL、0.05 mL肌醇，依次加入少量乙醇、氨水、四氫硼鈉混合，在40 ℃ 水浴加熱1 h，再依次加入冰醋酸10滴、1-甲基咪唑0.5 mL和乙酸酐5.0 mL，冰浴10 min，取油層，用氮氣吹干，用乙酸乙酯溶解，直接進行氣相色譜分析.

2.2 氣相色譜條件選擇

2.2.1 氣相色譜柱的老化在300 ℃下老化氣相色譜柱，并清潔進樣口和檢測器，確保檢測準確度.

圖1 單糖混合樣氣相色譜譜圖

由圖1可見，混合物中的各種單糖組分已經得到分離，該色譜條件可以完成多糖的組分分析.

2.2.4 標準曲線的繪制以不同進樣量進行測量，根據其積分面積與進樣量的濃度得到標準曲線的回歸方程見表1.

表1 各種單糖標準曲線的回歸方程及相關系數

2.2.5 準確度實驗取單糖乙酰化混合樣，進樣五次，得到各種單糖的積分面積的RSD值分別為：RSD鼠李糖=0.190 1%、RSD阿拉伯糖=0.184 2%、RSD木糖=0.195 1%、RSD肌醇=0.190 8%、RSD甘露糖=0.267 5%、RSD半乳糖=0.242 5%、RSD葡萄糖=0.172 7%，由此可見準確度良好.

2.3 蒙藥白頭翁多糖組分的分析

精密稱取白頭翁多糖約20 mg置于試管中，分別加入2 mol·L-1硫酸1.0 mL水解2 h,多糖水解后其組分主要為單糖.分別在其中加入一定量的肌醇作為內標物，用“2.1”中所述方法對其進行乙酰化處理，并進行氣相色譜分析，得到白頭翁多糖的單糖氣相色譜分析結果，見圖2，將圖3與圖2進行對比，得出所對應的物質即白頭翁多糖的單糖組分，根據標準單糖的積分面積和內標物質的積分面積算出各種單糖的摩爾比.