HPLC法測定芪黃顆粒劑中大黃素的含量

張昌文 彭宣文

（1 湖北省中醫藥高等專科學校，湖北 荊州 434020；2 湖北省荊州市中醫院，湖北 荊州 434000）

芪黃顆粒劑是由黃芪、大黃等藥精制而成，具有扶正固本，清熱祛邪，調節免疫機能的功效，臨床用于治療SLE等癥，經多年臨床驗證，療效確切[1,2]。大黃是方中的主要藥材，我們用HPLC法對大黃素的含量進行了測定，方法快速、準確、專屬性強、靈敏度高，故通過測定大黃素的含量來控制芪黃顆粒劑內在質量是科學的。

1 儀器與試藥

島津WateModel 510高效液相色譜儀；SPD，10A檢測器；C-R7A色譜處理機；Shim-PackCI C-ODS（150/Bin×4.6mm）色譜柱；大黃素對照品（供含量測定用）由中國藥品生物制品檢定所提供，芪黃顆粒劑為本院制劑中心制備，甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 試驗方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為島津C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇-水（11∶1）；流速為1.0mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：290nm；進樣量均為10μL。理論塔板數按大黃素峰計算應不低于3000。

2.2 對照品溶液的配制

精密稱取大黃素對照品約3.42mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，以此作為對照品貯備液。精密吸取上述對照品貯備液適量，加甲醇制成每1mL含大黃素0.0820mg的對照品溶液，搖勻即得。

2.3 供試品溶液的制備

取芪黃顆粒劑10.0g，研細（過二號篩），混勻，精密稱取10.7400g。用甲醇100mL浸泡過夜，過濾。吸取濾液20mL于水浴上揮去甲醇，加水20mL溶解，加鹽酸4mL，于沸水浴上酸化30min，冷卻后用氯仿萃取4次（30、20、20、20mL）合并CHCl3液。水浴揮干CHCl3，殘渣以甲醇溶解，定容于10mL容量瓶中，即得。

2.4 陰性對照試驗

取處方中除大黃外的其余成分按制劑工藝制成缺大黃陰性樣品，按“2.3供試品溶液的制備”方法處理，得缺大黃陰性對照溶液。

2.5 可行性試驗

精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL，在此條件下，大黃素與其它組分均能達到基線分離，供試品中大黃素的保留時間與對照品一致，陰性對照液無干擾。

2.6 線性關系考察

精密吸取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0mL分別置10mL容量瓶中。甲醇稀釋定容，吸取上述溶液各10μL進樣，按上述色譜條件測定峰面積，并以峰面積（Y）對進樣量（X）進行線性回歸，結果大黃素在0.0041～0.0246mg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。回歸方程y=630126.24×-1134.16，γ=0.9992。

2.7 精密度試驗

精密吸取上述大黃素對照品溶液（0.0082mg/mL）10L，連續進樣5次，測得λ=74984.8，RSD=0.35%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩定性試驗

取供試品溶液，立即注入液相色譜儀進行色譜分析，并每隔一定時問進樣1次，依法測定峰面積積分值，直至24h，數據絳統計學處理，其相對標準偏差RSI=0.8%。表明大黃素在所試的24h內穩定。

2.9 加樣回收率試驗

稱取芪黃沖劑4份，在其中3份中分別加入標準品溶液0.8、1.2、1.6mL，按樣品溶液制備方法操作。得三個不同濃度的加樣樣品液及一個樣品液，分別取10μL進樣測定，按上述方法依法測定，計算。其平均回收率為96.58%，相對標準偏差RSD=1.1%（n=5）。表明本法準確性較好，結果見表1。

表1 大黃素的加樣回收率

2.10 重復性試驗

取同一批次樣品（批號：20110428）6份，平行制備供試品溶液，按上述方法測定供試品中蘆薈大黃素的含量，數據經統計學處理，其相對標準偏差RSD=1.1%。表明該方法有較好的重復性。

2.11 樣品測定

取本品10g，研細（過二號篩），混勻，取2.0g，精密稱定，按“2.3供試品溶液的制備”方法操作，制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液l0μL，按上述色譜條件測定，結果見表2。

表2 大黃素的含量測定

3 討 論

3.1 芪黃顆粒劑中的大黃素以游離和苷的形式存在，因此，采用酸水解的方法使大黃素苷裂解產生苷元大黃素，能更準確地測定指標性成分的含量。

3.2 參照《中國藥典》2005年版一部大黃的含量測定方法 ，選擇甲醇-0.1%磷酸（85∶15）為流動相，結果不能使雜質峰與主峰很好地分離。對流動相進行了多次摸索，采用甲醇-水（11∶1）為流動相，試驗結果表明，在此條件下大黃素的保留時間適宜，與相鄰的色譜峰可保持良好的分離度，適合于大黃素的含量測定。

3.3 本含最測定方法中水解的時間比較關鍵，水解不完全則含量低。因此實驗過程中，應注意到以下幾點：①燒瓶浸入沸水浴中至頸部。②水解時間應從冷凝管滴水起計時，以保證水解完全；加入鹽酸后繼續回流，這時必須不斷振搖，以促使水解完全。

3.4 本文所用方法簡單，準確可靠，測定迅速，可以作為控制芪黃顆粒的質量標準。

[1] 張翠,劉穎,王曉白.HPLC測定芪丑湯中大黃素的含量[J].黑龍江醫藥,2008,21(2):1-2.

[2] 陳巖,黃青,劉秀華,等.HPLC法測定婦炎消片中大黃素及大黃酚的含量[J].中國藥師,2008,11(9):1074-1076.