黃芪桂枝五物顆粒對光化學誘導腦血栓形成大鼠的影響試驗

沈 欣，李 文，殷小杰，李德鳳，宗桂珍

(中國中醫科學院中藥研究所，北京 100700)

黃芪桂枝五物湯是《金匱要略》中治療血痹證的方劑，其所治療血痹證的基本病機是陽氣不足、瘀血阻絡。而其益氣溫經、活血通絡治則符合中風病恢復期和后遺癥期的基本治法，臨床中也有很多報道，因此探討本方的藥效特點，是進一步開發重點工作之一。故此我們觀察了本方對光化學誘導腦血栓形成大鼠影響的試驗中對梗塞面積、血管損傷區、血小板聚集及血漿t-PA等各項指標的影響變化，以探討其可能的作用機制。

1 材料

1.1 藥物

黃芪桂枝五物顆粒由北京醫科大學藥學院應用藥物研究所提供，為黃棕色粉末(批號010903)。陽性對照藥為龍芪溶栓膠囊，山東華能制藥廠(批號010215)。

1.2 動物

Wistar大鼠，體重190g±20g，購于北京醫科大學動物中心(動物合格證號醫動字01-3056)，飼養于本所動物飼養中心。

1.3 試劑和儀器

化學誘導劑:化學熒光染料四碘四氯熒光素二鈉(rose bengal RB)，分子量為1017.60，分析純(北京化工廠，批號810627)。取RB溶于0.9%生理鹽水中，濃度為5.0%，經0.45 μm超濾后遮光低溫保存備用。光源采用北京泰克儀器公司生產的光導纖維冷光源。在光導纖維出口加濾光片，使出射光波波長為540±30nm。光導纖維輸出口至照射區距離為2mm，光束投射中心直徑為0.4cm，光照強度為5.6×105cd/m2。大鼠顱腦定位儀(北京卓立漢光儀器有限公司)，t-PA發色底物試劑盒(太陽生物技術公司，批號000901)酶標儀，Bi0-Rad Laboratories，Inc.450。ScanWizard 掃描軟件及清華紫光掃描儀。

2 方法

2.1 分組和給藥

大鼠72只共分6組，每組12只，模型組、假手術組、陽性藥組0.162g·kg－1，黃芪桂枝五物顆粒0.828、0.414、0.207g·kg－13 個劑量組。ig，模型組、假手術組ig給予等量的水溶液，1次/d，連續15 d，容積為 10ml·kg－1。

2.2 手術方法

手術前1 h動物灌胃給藥1次后，用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉動物，頭頂備皮，常規皮膚消毒，沿頭正中切口暴露顱骨，使用眼科異物針，小心剝離右側附著于頂骨處的軟組織及肌肉，電凝止血，完全暴露右側頂骨，使用自制微型開顱鉆(3V、1W)，鉆頭為直徑0.5cm平頭金鋼砂磨鉆，以矢狀縫右側0.3cm、冠狀縫后0.3cm為中心開直徑0.6 cm的顱窗，去除顱骨表層骨板及髓層，保留下層骨板及硬腦膜，磨孔過程中生理鹽水反復沖洗創面，消除操作過程中產生的機械熱及殘骨渣。股iv 5%RB(125mg·kg－1)，時間為1min。注射 RB結束后5min，移入光導纖維照射10min，位置為顱窗腦區。整個手術過程中，環境溫度保持于25.0℃ ±1.0℃。

2.3 觀察指標

動物于光照結束后10min，假手術組于注射RB結束后25min，右側眼眶取血共 2mL，測定 t-PA、紅細胞壓積及血漿纖維蛋白原含量。取血后立刻經舌下靜脈注射1%Evans Blue(Fluka，分析純)1mL，1h后斷頭取腦，去除小腦及嗅球，采用 ScanWizard掃描軟件及清華紫光掃描儀，將腦部圖像掃描輸入計算機。用圖像分析軟件計算梗塞灶(紅染區)及VIP(藍染區)的范圍(占右半腦相對面積的百分比)。血小板聚集的測定:因本實驗動物注射RB染料，無法采用常規光密度法測定。經腹主動脈采枸櫞酸鈉(3.8%，1∶9)抗凝血后，用顯微觀察法評價ADP誘導的血小板聚集。顯微鏡放大倍數為150，ADP誘導富血小板血漿的終濃度為0.7μmol·mL－1。記分標準定為視野內無聚集為0，所見最大聚集體中血小板數 ＜5記為 1，5～10記為 2，10～20為 3，＞20為4。

2.4 統計學處理

各組間方差齊性檢驗采用F檢驗，各組間均數比較采用t檢驗。指標間的線性相關性用Spearman及雙側顯著性檢驗。

3 結果

表1 黃芪桂枝五物顆粒對大鼠腦梗塞及血管損傷血小板聚集的影響(s，n=12)

表1 黃芪桂枝五物顆粒對大鼠腦梗塞及血管損傷血小板聚集的影響(s，n=12)

注:與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01

組 別 劑量g·kg－1梗塞面積紅區占右半腦%血管損傷區面積藍區占右半腦%血小板聚集記分“模 型 組 —16.8±3.28 20.4±4.97 2.17±0.94假手術 組 — 無梗塞 無損傷 0.75±0.622)龍芪溶栓組 0.162 14.8±3.13 17.9±3.62 1.58±1.00芪桂顆粒組 0.828 12.2±2.502)18.0±2.84 1.25±0.971)0.414 13.1±2.142)16.9±2.501) 1.25±1.061)0.207 11.5±2.192)18.8±3.041)1.33±1.07

表2 黃芪桂枝五物顆粒對大鼠腦梗塞各項血流變指標的管影響(s，n=12)

表2 黃芪桂枝五物顆粒對大鼠腦梗塞各項血流變指標的管影響(s，n=12)

組 別 劑量g·kg－1血漿t-PA活性IU·ml－1紅細胞壓積%纖維蛋白原mg·dl －1－ 0.40±0.24 45.3±4.81 105±33假 手 術 組 － 0.74±0.42 45.2±4.88 140±331)龍芪溶栓組 0.162 0.57±0.37 45.8±4.09 136±47芪桂顆粒組 0.828 0.79±0.372)45.7±4.03 139±431)0.414 0.75±0.461) 45.3±2.72 142±52模型組0.207 0.51±0.28 44.7±3.28 136±42

以上結果顯示，模型組與假手術組之間，除紅細胞壓積無差異外，其他各項指標均有顯著性差異，說明大鼠腦梗塞和血管損傷模型成功。黃芪桂枝五物顆粒能明顯減少模型大鼠的腦梗塞面積，抑制血小板聚集，并維持纖維蛋白原含量在較高水平。

4 討論

在中風病的恢復期和后遺癥期，多是虛實夾雜，既有陽氣不足又見瘀血阻絡。根據此期的病機特點，在治療上宜扶正祛邪、益氣活血為常用之法。黃芪桂枝五物湯能益氣溫經、和經通痹，其中黃芪為君藥，大補元氣，使血行表固;赤芍為臣藥，活血化瘀、通絡止痛。與黃芪配伍，一方面可以共奏益氣活血之功，另一方面使黃芪補益而無呆滯之虞，赤芍活血而無傷正之慮。佐桂枝以溫經通陽，助黃芪、赤芍通達經絡而運行氣血，佐生姜以宣發陽氣，氣行而血不滯;大棗益脾，以助氣血生化之源。諸藥合用，可以益氣溫經、活血通絡，符合中風病恢復期和后遺癥期的基本治法。在我們試驗中發現，本藥對于腦梗塞的發生有相當顯著的抑制作用，對于血管損傷的發生也有一定抑制作用，表現為藍區面積的減小。黃芪桂枝五物顆粒對于血小板聚集有明顯抑制作用，纖維蛋白原含量也較模型組為高。因此，黃芪桂枝五物顆粒的抗血小板聚集作用可能是其抗腦梗塞和血管損傷的主要機制，從而使給藥組血栓形成的程度低于模型組。此外，黃芪桂枝五物顆粒使t-PA維持正常水平，也是限制血栓發展的重要因素。

[1]張仲景.傷寒論[M].上海:上海科技出版社，1970:121.

[2]韓 東，廖福龍，李 文，等.冷光源光化學誘導局灶性腦梗塞及血管損傷半暗帶大鼠模型[J].中國微循環雜志，2002，15(1):71.