南昌地區獻血者血液內毒素含量調查

苗燕平，王 健，韓 玲，何華慶

(江西省血液中心，江西 南昌 330077)

輸血安全、有效是采供血機質量目標的重點[1-2]，細菌污染是影響血液質量最常見因素之一，而且主要是由于革蘭陰性細菌感染，革蘭陰性細菌可產生內毒素，為此，本中心采用動態濁度法檢測南昌地區無償獻血人群血液內毒素，現將調查報告如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 從采集的血液中分離的血漿標本共326人份標本，自愿獻血者符合國家獻血健康要求的年齡l8～55歲，其中男性172人份、女性154人份，血型A、B、O和AB分別為96人份、90人份、109人份和31人份。

1.2 試劑和儀器 EKT-1M動態內毒素檢測試劑盒 (批號：EKT-107, 靈敏度0.05EU/ml，北京金山川)；細菌內毒素檢查用水(批號200910)；標準內毒素(批號 20090525，4EU/支，北京金山川)； MB-80微生物快速動態檢測系統、T01智能恒溫儀、冰浴槽均由北京金山川科技發展有限公司提供。

1.3 實驗方法

1.3.1 血漿制備 血液采集與血液保存液抗凝劑(枸櫞酸鹽)充分混均后,取血袋導管離心，選擇淡黃澄清的正常血漿(去除脂肪、溶血等異常血漿)并熱合使用，血漿樣本直接檢測或-25℃冰凍保存待檢；實驗使用玻璃試管、吸頭均不含有外源性內毒素。

1.3.2 待測樣品制備 取上述血漿0.10ml，加入裝有0.90ml樣品處理液中，混勻后置70℃保溫10min，取出后放入冷水浴中冷卻至37℃以下即為待測血漿樣品。

1.3.3 樣本檢測 取待測血漿樣品0.20ml加入反應主劑中，溶解后使用微量加樣器轉移至9mm×65mm無熱原平底反應管中，插入MB-80微生物動態檢測系統中進行反應，反應結束后由標準曲線自動計算出待測血漿中內毒素含量。

2 結果

326 人份血漿內毒素含量測定結果顯示見表1。

表1 326份樣本內毒素測定結果

3 討論

革蘭陰性細菌為保存血液的主要感染菌群，其產生內毒素的成份為細胞壁的脂多糖，具有很強的細胞毒作用，可引起發熱、微血管擴張、炎癥反應，甚至引起高熱、低血壓休克和DIC[3]。因此對血液內毒素監測和臨床輔助診斷越來越受到國內外的關注。本實驗室引進MB-80微生物動態檢測系統進行細菌內毒素定量檢測，通過實驗與摸索，建立了血液內毒素的檢測方法。

從本次檢測結果可以看出，南昌地區正常人群血液內毒素含量低，所使用鱟試劑靈敏度達不到人體內毒素含量最低水平，從而顯示出血液內毒素含量＜0.05183EU/ml。因此，生產廠家能盡快提供靈敏度更高、穩定性更好鱟試劑，以便進一步檢測顯得十分必要。值得一提的是，12、32、89、90、241 號樣本實測值均＞0.05183EU/ml。 由于樣本未能重新檢測，但筆者分析認為可能是檢測污染所致。隨著內毒素檢測廣泛應用，解決好血液樣本對鱟試劑干擾和試劑靈敏度問題，檢測血液的內毒素含量，對于完善血液內毒素檢測和建立本地區正常人群細菌內毒素參考范圍意義重大。

MB-80微生物動態檢測系統進行血液內毒素檢測，能直觀地觀察樣品的變化情況，尤其是臨界值的樣本，對于血液及其制品的質量控制具有非常重要的意義[2]。由于血液成分十分復雜，對內毒素動態濁度檢測實驗的干擾較大，需要選取無乳糜、無溶血樣本，同時70℃水浴10min，目的是消除血漿蛋白質對實驗干擾；優化血漿同體系模型法建立標準曲線,有效的解決受檢樣本與標準系統的誤差；最后是嚴謹操作防止內毒素污染，是獲得檢測結果準確的重要保證措施。

[1]曾曉悅,吳欣欣.2009年獻血淘汰人群情況分析[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(2):177-178.

[2]王旭安,曾曉悅.2010年血液報廢情況分析[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(4):433-434.

[3]單路娟,邱 陽,郭 莉,等.內毒素的測定與臨床意義[J].大連醫科大學學報,2004,26(3):231-233.

[4]張 維.MB-80微生物動態檢測系統應用于血站內毒素檢測探討[J].中國當代醫藥,2010,17(7):130-131.