兒童 AST、LDH、CK、α-HBDH、CK-MB 項目生物參考區間適用性驗證探討

甘立新，韓 剛，吳遠江，鄭建華，楊慧蓉，周劍楠

(1、湖北省咸寧市婦幼保健院，湖北 咸寧 437100；2、湖北省秭歸縣中醫醫院，湖北 秭歸 443600)

生物參考區間是解釋、分析檢驗結果的依據和尺度[1]。臨床檢驗對象是患者，由于年齡、性別、民族、居住地等原因引起的差異，不同個體的生物參考區間也有差異。另外，在一些醫院實驗室對同一檢測項目使用多套檢測系統，由于檢驗方法的差異，也會導致結果的不一致；或同一檢測方法，儀器試劑不同，檢驗結果也會產生差異。根據ISO15189：2003《醫學實驗室—質量和能力的專用要求》，實驗室必須慎重建立自己的生物參考區間，并定期評審。本文采用NCCLS C28-42推薦方法，對心肌酶五項指標 AST、LDH、CK、α-HBDH、CK-MB 的生物參考區間的適用性進行驗證。

1 材料與方法

1.1 標本來源 健康參考個體40名來源于體檢中心幼兒入園或入學體檢的健康兒童，健康參考個體的具體條件：(1)沒有任何影響檢測結果的生理指標；(2)未服用藥物或進行飲食治療；(3)發育、精神正常，無心血管、肺、腎和肝、膽、胰等器質性疾患；(4)3個月內無輸血和手術史；1個月內未患任何疾患。

1.2 標本準備與處理 對合格的參考個體按 《檢驗標本采集手冊》采集標本、送檢及時分離血漿，所測試標本性狀正常，無溶血、無脂血。五個生化項目于采集標本后2h內完成測試，

1.3 儀器 日立7020全自動生化分析儀。操作過程嚴格遵照實驗室SOP文件的有關要求，操作人員固定，儀器運轉狀態良好。

1.4 方法

1.4.1 質控 質控品為美國bio rad公司生產，質控品批號為201101，有效期至2012年1月。

1.4.2 校準 校準品為英國朗道公司生產，校準品批號為682UN，有效期至2012年12月。

1.4.3 試劑 天冬氨酸氨基轉移酶(AST)為上海豐匯公司提供；乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)、α-羥丁酸脫氫酶(α-HBDH)、肌酸激酶同工酶(CKMB)為德賽診斷系統(上海)有限公司提供。

1.4.4 驗證項目的確定 本文選擇的項目有5項：AST、LDH、CK、α-HBDH、CK-MB， 參 照 NCCLSC 28-42推薦方法要求進行驗證。

1.4.5 對參考區間的驗證 收集40名健康個體標本，在經過性能評價、驗證可靠的檢測系統上檢測，檢測結果95%(38名)在現用或新建檢測方法新引用參考區間以內，2名結果在現用或假設參考區間以外，判定該參考區間有效。假如實驗數據有3名或3名以上檢測結果在參考區間以外，先檢查檢測系統性能、檢測程序是否正確，然后考慮該項目是否具有人群生物特性，做進一步調查，重新選擇合適的生物參考區間，必要時考慮重建生物參考區間。

1.1.6 檢測系統/方法準備 參考區間驗證試驗前需掌握檢測系統的性能和使用的檢測方法，對檢測系統/方法分析性能進行有效驗證、評價，確定實驗室檢測系統性能關鍵指標不精密度和不準確度的評價方法和可接受標準，保證檢測系統/方法的準確、穩定。檢測系統用配套的質控品每天做質控，按儀器說明定期校準，在檢測系統在控狀態下檢測實驗標本，記錄實驗數據，保證驗證項目結果的可靠。

2 結果

本文檢測的5個檢測項目的驗證結果見表1。

在健康參考個體組AST項目40名結果分布范圍10～44U/L。參考區間上線超出了現用的參考區間0～40U/L，查閱原始結果為 39 名結果在 0～40U/L，超出范圍的1名檢測結果是：44U/L。在健康參考個體組LDH項目40名結果分布范圍153～281U/L。參考區間在現用的參考區間150～300U/L之內。在健康參考個體組α-HBDH項目40名結果分布范圍65～202U/L。參考區間上線超出了現用的參考區間0～182U/L，查閱原始結果為38名結果在0～182U/L，超出范圍的2名檢測結果是：191U/L、202 U/L。在健康參考個體組CK項目40名結果分布范圍37～241U/L。參考區間上線超出了現用的參考區間24～229U/L，查閱原始結果為39名結果在24～229U/L，超出范圍的1名檢測結果是：241U/L。在健康參考個體組CK-MB項目40名結果分布范圍0～24U/L。參考區間在現用的參考區間0～24U/L之內。

表1 兒童心肌酶項目現用參考區間驗證結果

3 討論

病毒性心肌炎已成為兒童臨床上的常見病，且發病率有上升趨勢[2]。目前兒童病毒性心肌炎診斷標準中，心肌酶仍為主要指標。本文LDH、CK-MB兩個項目完全適用，雖然AST在檢測的40例中有1例超過40U/L(為44U/L)，α-HBDH在檢測的40例中有 2 例高于 182U/L(為 191U/L、202 U/L)，CK 在檢測的 40例中有 1例高于 229U/L(為 241U/L)，但總體不違反 95%的可信度的要求，說明 AST、α-HBDH、CK這三個項目試劑說明書上的參考區間還是適用的。

眾所周知，生物參考區間是判斷健康與否的標準，實驗室必須保證給臨床提供的生物參考區間正確適用，否則會導致誤診誤治，所以實驗室建立生物參考區間工作意義重大，但由于一般實驗室現行條件自行制定生物參考區間存在客觀難度，因而對實驗室的生物參考區間進行驗證是十分必要的，也是可行的。當發現生物參考區間出現偏離，我們應采集大量健康人群的標本進行生物參考區間的建立，以確保生物參考區間的準確性。

本次驗證表明心肌酶5項指標AST、LDH、CK、α-HBDH、CK-MB現用的參考區間適用本地兒童。

[1]陳桂山.臨床生化檢驗項目生物參考區間適用性驗證探討[J].中華檢驗醫學雜志,2008,31,170.

[2]吳梓梁.小兒內科學[M].鄭州:鄭州大學出版社,2003:1793-1795.