唾液生長激素釋放肽在腮腺、頜下腺、舌下腺中的表達

馬 穎

自1999年唾液生長激素釋放肽(Ghrelin)被發現以來[1］，許多研究表明Ghrelin主要由胃黏膜X/A樣細胞分泌，其次來源于腸道、胰、腎、胎盤、垂體及下丘腦。而最新的研究顯示，在人的唾液中也有Ghrelin的表達[2］，但是唾液 Ghrelin的來源尚不明了。唾液腺組織中是否有Ghrelin存在尚有待了解。本研究擬采用免疫組織化學的方法檢測Ghrelin在腮腺、頜下腺、舌下腺中的表達，探討唾液腺與唾液Ghrelin表達的關系。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 兔抗人Ghrelin抗體(美國Phoenix公司)，3%過氧化氫，正常羊血清封閉液(北京中山公司)，DAB顯色液(北京中山公司)，蘇木精稀釋液，二抗原液(辣根過氧化物酶標記的兔Ig抗體，北京中山公司)。

1.2 標本制取 選擇口腔頜面部惡性腫瘤患者頸部檢查淋巴結陰性、行選擇性頸清掃、病理證實為正常的頜下腺標本7例，腮腺標本3例，以及口底腫物擴大切除時舌下腺標本3例，切取部分腺體組織作為檢測腺體Ghrelin表達的標本。

1.3 免疫組織化學方法 (1)石蠟切片脫蠟至水，將切片放于60℃燒烤箱烘烤20 min以防止掉片。取出后馬上放入二甲苯中進行脫蠟。二甲苯10 min，無水乙醇和95%、85%、80%、70%乙醇各5 min，水洗5 min。(2)3%H2O2室溫孵育 5～10 min，以消除內源性過氧化物酶的活性。(3)蒸餾水沖洗，PBS浸泡5 min。(4)正常山羊血清封閉，室溫孵育20 min，去血清，勿洗，滴加適當比例稀釋的一抗，37℃孵育2 h或4℃過夜。(5)PBS沖洗3次，3 min/次。(6)滴加適當比例稀釋的二抗，室溫孵育20 min。(7)PBS沖洗3次，3 min/次。(8)DAB顯色。(9)蘇木精復染，清水沖洗5～10 min。(10)脫水透明，封片。(11)用圖像分析儀進行細胞學定位，觀察Ghrelin在唾液腺中的表達。

2 結果

在腮腺、頜下腺及舌下腺染色的標本切片中，可以明顯觀察到腺體部分區域顯示深棕色顆粒(圖1～3)。正常腮腺的切片中可見Ghrelin在紋管細胞漿呈強陽性表達，漿液性腺胞胞漿有少量表達，見圖1。頜下腺的切片中可見:Ghrelin在紋管細胞呈強陽性表達，漿液性腺細胞漿少量表達，黏液性腺胞胞漿陰性表達，見圖2。舌下腺的切片中可見Ghrelin紋狀管和閏管細胞呈強陽性表達，黏液性腺細胞胞漿呈陰性表達，見圖3。陽性顯色主要位于導管細胞的胞漿，且紋管和閏管細胞的胞漿均可觀察到Ghrelin陽性表達，漿液性腺胞細胞的胞漿中有少量存在陽性表達，而黏液性腺胞胞漿則無Ghrelin的表達。上述3大腺體均有Ghrelin陽性表達，不同部位未見明顯差異。

圖1 Ghrelin在正常腮腺中的表達(DAB×200)

3 討論

Ghrelin主要由胃黏膜X/A樣細胞分泌，其次來源于腸道、胰、腎、胎盤、垂體及下丘腦等部位。在胃腸道中，胃底部的Ghrelin含量最高，其次為十二指腸和回腸，結腸最低。血漿和組織中的Ghrelin含量不同，正常人血漿中Ghrelin的濃度100～120 pmol/L，胃和小腸中的濃度為腎的140倍，內腎組織中的濃度又高于血漿濃度數倍[3－4］，提示這些組織可能通過自分泌和旁分泌在局部發揮作用。本研究通過免疫組織化學的方法，觀察到在正常唾液腺組織中均有Ghrelin表達，主要分布部位在導管細胞的胞漿，漿液性腺胞胞漿也有微弱表達，而黏液性腺胞無表達。

唾液腺組織不僅是外分泌器官，也具有內分泌功能。己知唾液腺合成分泌入血的肽類物質達30種以上，常見的激素樣物質或調節肽有表皮生長因子、神經生長因子、腮腺激素、高血糖素、胃泌素、緊張素、促紅細胞生成素、心房肽(心鈉素)、大活動蛋白、S-100蛋白、神經元特異丙烯醇化酶、抑生長素、突觸泡蛋白、降鈣素等。本研究結果提示，唾液腺組織可以合成、分泌Ghrelin，唾液腺是除腸道、胰、胃、腎、胎盤、垂體及下丘腦等部位以外的又一個Ghrelin分泌器官，唾液中的Ghrelin可能來自唾液腺的組織。

雖然多數內分泌多肽可由不同的唾液腺合成、存儲、分泌，但絕大多數分泌入血的肽類是由頜下腺合成分泌，舌下腺也有類似的功能。只有少數動物的腮腺導管系統中可見到某些肽類，如豬的腮腺可合成高血糖素和胃泌素，而狗的腮腺可合成胃泌素。本研究中，腮腺、頜下腺及舌下腺均有明顯的Ghrelin表達，其間無明顯差異，說明這3大唾液腺均可合成和分泌Ghrelin。

唾液腺內分泌物質的合成幾乎全部在導管系統。導管系統的顆粒導管細胞及紋管細胞是合成并儲存這些多肽物質的主要場所。人類唾液腺內沒有顆粒導管系統，因而內分泌物質可能會存在于紋管細胞內。本研究結果顯示，Ghrelin在紋管及閏管細胞均呈強陽性表達，提示人體唾液腺組織合成和分泌Ghrelin的主要部位在紋管細胞和閏管細胞。

Ghrelin分泌機制尚不清楚。唾液腺組織中Ghrelin的表達與唾液中Ghrelin的濃度有何關系，以及進食前后唾液腺組織中的Ghrelin表達是否有差異尚待進一步研究。

[1] Date Y，KojimaM，Hosoda H，etal.Ghrelin，a novelgrowth hormone-releasin G acylated peptide，is synthesized in a distinctendocrine cell type in the gastrointestinal tractsof ratsand humans[J］.Endocrinology，2000，141:4255－4261.

[2] Teber F，Grau M，Mena MP，etal.Epidermal growth factor secreted from submandibular salivary glands interfereswith the lipolytic effect of adrenaline in mice[J］.Endocrinology，2000，141:876－882.

[3] Rindi G，Necchi V，Savio A，et al.Characterrisation of gastric Ghrelin cells inman and othermammals:syudies in adultand fetal tissues[J］.Histochem Cell Biol，2002，117:511 －519.

[4] Matsumoto M，Hosoda H，Kitajima Y，etal.Structureactivity relationship ofGhrelin:pharmacological study ofGhrelin peptides[J］.Biochem Biophys Res Commun，2001，287:142－146.