調肝止痛膠囊中揮發油的包合工藝研究

鄭 琰 王 芳 談 靜 曾 倩

1.成都中醫藥大學附屬醫院藥劑科，四川成都 610072；2.四川省中醫藥科學院藥學研究所，四川成都 610041；3.成都中醫藥大學附屬醫院婦科，四川成都 610072

調肝止痛膠囊是由白芍、枳殼、乳香和沒藥等8味藥組成的中藥復方制劑，具有養血益肝、行氣活血、祛瘀止痛的功效，在臨床上用于治療肝郁血瘀型痛經。方中枳殼、乳香和沒藥等3味藥材含揮發油，且揮發油為本方的活性成分，具有鎮痛作用。為減少揮發油在制劑和貯存中的揮發，提高藥物穩定性，方便臨床藥物的使用，減少每日服藥劑量，本研究對枳殼、乳香和沒藥提取揮發油，并用β-環糊精包合，以揮發油的包合率和收得率為考察指標，采用正交實驗，對包合工藝條件進行了優選，現報道如下。

1 儀器與試藥

JB-3型定時控溫磁力攪拌器（上海雷磁新涇儀器有限公司）；JA2003電子天平（上海精密儀器有限公司）； DG/20-002臺式干燥箱；β-環糊精（天津市博迪化工有限公司）；枳殼、乳香和沒藥購于四川新荷花中藥飲片有限公司，經檢驗符合2010版《中國藥典》一部規定；無水乙醇為分析純。

2 方法與結果

2.1 揮發油的提取

枳殼、乳香和沒藥揮發油的提取采用單因素考察，以揮發油提取率為指標，考察浸泡、加水量、提取時間對提取效果的影響。按照《中國藥典》規定的揮發油測定法甲法[1]進行試驗。結合試驗結果及生產實際，確定揮發油提取工藝的最佳方案為：加10倍量水，不浸泡，提取6 h。在此條件下，揮發油提取率為1.79%。

2.2 包合物的制備方法

采用飽和水溶液法包合：精密稱取定量的β-環糊精，置具塞的錐形瓶中，加入適量蒸餾水，水浴加熱使溶解，放冷至規定溫度，于磁力加熱攪拌器上恒溫攪拌。用移液管量取揮發油1 mL，按1︰2比例用無水乙醇溶解稀釋，將揮發油稀釋液逐滴加入β-環糊精溶液中，加塞，恒溫攪拌至規定時間，放冷，置冰箱中冷藏24 h，抽濾，用少量純化水洗滌容器，抽干，以少量無水乙醇洗滌濾渣，在40℃下低溫烘干，即得疏松白色包合物粉末。

2.3 包合物中實際含油量的測定

將制得的包合物置500 mL圓底燒瓶中，加蒸餾水200 mL，連接揮發油測定器，照《中國藥典》揮發油測定法甲法[1]操作，讀取揮發油量，計算包合物實際含油量。

2.4 揮發油空白回收率測定

精密量取揮發油1 mL，置500 mL圓底燒瓶中，加蒸餾水200 mL，水蒸氣蒸餾后測定揮發油量，計算空白回收率，揮發油空白回收率=收集揮發油量/加入揮發油量×100%。試驗回收的揮發油量為0.95 mL，則空白回收率為95.0%。

2.5 揮發油包合率和包合物收得率的計算

精密稱定1 mL揮發油重為0.951 g，揮發油包合率=包合物實際含油量/（揮發油投入量×空白回收率）×100% ；包合物收得率=包合物實際重量/（β-環糊精投入量+揮發油投入量）×100%

2.6 包合工藝條件篩選

根據預試驗及文獻資料[2-3]，揮發油包合主要受β-環糊精與揮發油的比例、包合溫度、包合時間3個因素的影響，故將其作為考察因素。以揮發油包合率、包合物收得率為評價指標，權重系數分別定為0.7和0.3，采用正交表L9（34）設計試驗，計算揮發油包合物包合率、收得率，并進行綜合評分（綜合評分=0.7×包合率/最大包合率+0.3×收得率/最大收得率），確定最佳包合工藝。其因素水平安排見表1。試驗方案及實驗結果見表2。

表1 因素水平

表2 正交試驗結果

2.7 包合工藝條件的確定

根據上述正交試驗數據，采用SPSS 13.0軟件進行方差綜合分析，結果見表3。結果分析：由直觀分析可知，影響包合工藝的因素順序為：β-環糊精∶油比例＞包合溫度＞包合時間，β-環糊精︰油比例對包合工藝影響最大。經方差分析，β-環糊精︰油比例對包合工藝有顯著影響，包合溫度和包合時間對包合工藝無顯著性影響，可見最佳包合工藝為：A3B3C2，即β-環糊精︰油比例10︰1，包合溫度60℃，包合時間2 h。

表3 方差分析結果

2.8 驗證試驗

按照所選最佳包合工藝，即β-環糊精︰油為10︰1，包合溫度60℃，包合時間2 h，每次取揮發油1 mL，平行驗證3批。結果3批工藝的包合率分別為97.68%、98.48%、95.96%，平均值為97.37%，RSD=1.32%；收得率分別為71.57%、74.50%、71.36%，平均值為72.48%，RSD=2.42%，可見該包合工藝穩定可行。

3 討論

乳香、沒藥的成分主要為揮發油、樹脂和樹膠，具有活血，行氣，止痛的功效，在成方制劑中大多以藥粉直接入藥。文獻報道乳香沒藥為主要肝毒性藥材，乳香沒藥不同部位中，揮發油毒性最低，且其揮發油具有鎮痛作用[4-5]，用揮發油β-環糊精包合物替代生藥粉入藥，既能保證療效又可降低毒性、減少臨床日服藥劑量，具有較好的應用前景。本研究采用雙指標對揮發油的包合工藝進行評價，考慮到揮發油的包合率是衡量包合效果的重要指標，收得率次之，故進行正交試驗綜合評價時，包合率和收得率的綜合評分權重系數分別定為0.7和0.3。優選包合工藝為：β-環糊精︰揮發油比例為10︰1，包合溫度60℃，包合時間2 h。該條件下揮發油包合率和收得率穩定且高。調肝止痛膠囊為固體制劑，將揮發油制成β-環糊精包合物，使其粉末化后，再與浸膏粉及輔料成型，可減少揮發油在貯存過程中的氧化、變質及揮發，掩蓋刺激性氣味，提高藥物的穩定性；該法操作簡單，設備要求不高，結果可靠，便于工業化生產。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄63.

[2] 于維萍，辛義周.乳香、沒藥揮發油β-CD包合物的實驗研究[J].中國藥房，2007，18（18）：1379-1380.

[3] 盧鵬偉，牛艷陽，李更生.制乳香、制沒藥揮發油β-環糊精包合工藝的研究[J].河南大學學報 （醫學版），2008，27（2）：34-35.

[4] 鄭杭生，馮年平，陳佳，等.乳香沒藥的提取工藝及其提取物的鎮痛作用[J].中成藥，2006，24（11）：956-959.

[5] 談英，徐鑫，周昆，等.乳香沒藥及其提取物給藥12周對大鼠肝毒性研究 [J].中國藥物警戒，2010，7（4）：193-195.