Caveolin-1在前列腺癌中的表達及臨床意義

盧桂堯 楊永強 范小明

前列腺癌(prostatic carcinoma，PCa)是一種嚴重威脅男性健康的惡性腫瘤，目前在美國前列腺癌的發病率已經超過肺癌成為第一位危害男性健康的腫瘤[1]，近年來我國人前列腺癌發病率有明顯上升趨勢，但是目前前列腺癌病因及發病機制尚未完全明確。Caveolin-1(小窩蛋白)是caveolae膜結構的標記性蛋白，它與細胞信號傳導、物質轉運、細胞增殖等密切相關，與腫瘤發生、發展的關系也非常密切[2]。Caveolin-1在大多數腫瘤形成中可能發揮抑癌基因樣作用[3];而在極少數腫瘤中能促進癌細胞增殖和轉移。本實驗通過免疫組化來研究caveolin-1在前列腺癌中的表達情況，以探討caveolin-1與前列腺癌臨床預后意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院1999～2003年前列腺癌石蠟標本50例(均取自腫瘤原發灶)，經病理學確診。年齡45～78歲，中位年齡59歲;于手術中取得后經4%多聚甲醛固定，并制成石蠟標本。

1.2 試劑 兔抗人Caveolin-1蛋白多克隆抗體為Santa cruz產品，稀釋度為1:50;EnVision免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術公司。

1.3 方法 采用免疫組化EnVision法。石蠟標本4 μm連續切片，其中一片用做常規HE染色，其余用做免疫組化。切片脫蠟至水，3%H2O25～10 min滅活內源性酶，蒸餾水洗3遍。微波修復抗原，滴加抗原修復液室溫10 min，蒸餾水洗3遍。滴加正常山羊血清封閉液室溫10 min，甩去血清后滴加1:50 caveolin-1多抗，4℃過夜，0.5 mol/L PBS洗5 min×3次。滴加辣根過氧化物酶(HRP)抗兔二抗，37℃，50 min，0.5 mol/L PBS洗5 min×3次。經DAB顯色，蘇木素輕度復染，脫水、透明、封片。陰性對照用PBS代替一抗。

1.4 結果判定 采用Olympus光學顯微鏡觀察caveolin-1的表達強度，標準為0分:0% ～5%腫瘤細胞染色，1分:6% ～25%腫瘤細胞染色，2分:21% ～50%腫瘤細胞染色，3分:50%以上腫瘤細胞染色。0分被認為為陰性，而1，2，3分則為陽性。

1.5 統計學方法 采用SPSS16.0軟件分析數據。Kaplan-Meier法進行生存分析并繪制生存曲線，log-rank檢驗比較各組生存率，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Caveolin-1在前列腺癌組織中的表達 免疫組化結果顯示Caveolin-1在前列腺癌組織中的表達明顯高于正常前列腺黏膜(圖1)。在50例前列腺癌組織中，陰性為15例，陽性為35例。Caveolin-1在前列腺癌組織中的陽性表達率為70%。

圖1 免疫組化顯示Caveolin-1在前列腺癌組織中的表達，定位于包膜胞漿。(箭頭所示為腫瘤間質)

2.2 Caveolin-1與前列腺癌患者預后的關系 對50例前列腺癌患者進行生存預后分析，Kaplan-Meier分析顯示Caveolin-1陽性的前列腺癌患者的預后差，而陰性的前列腺癌患者預后好。Log-rank比較兩組生存率差異有統計學意義(圖2)(P=0.028)。

圖2 Kaplan-Meier評估Caveolin-1在前列腺癌組織中的表達與預后

3 討論

Caveolae是1953年由Palade發現的，當時命名為質膜囊泡(Plasmalemmal vesicles)。在Caveolae的組裝過程中Caveolin及膽固醇起關鍵作用，如果敲除Caveolin的基因，即不能形成Caveolae，所以 Caveolin作為 Caveolae的標記蛋白[4]。Caveolin-1是20世紀90年代中期開始的克隆，其基因定位于7q31.1[5]，而此位點在多種腫瘤中(如肝癌、卵巢癌、乳腺癌、子宮肌瘤、胃腺癌等)出現缺失或斷裂，提示Caveolin-1與腫瘤的發生發展密切相關。研究提示Caveolin-1過表達與腫瘤分級和淋巴結轉移有關，在一些抗藥性癌細胞株中，如抗紫杉醇肺癌細胞系、Caveolin-1抗雄激素大鼠前列腺癌細胞株，Caveolin-1亦表達上調。這些研究說明，Caveolin-1可能與一些腫瘤的發生、發展、浸潤、轉移及腫瘤細胞的耐藥性有一定的關系。近年的研究顯示，在膀胱上皮癌中，Caveolin-1表達明顯升高，且有促進癌細胞的增殖及淋巴結的轉移的作用[6，7]。這提示 Caveolin-1在不同的腫瘤中發揮著不同的作用。

本研究結果顯示，Caveolin-1在前列腺癌組織中呈高表達，而在正常組織中不表達或弱表達，腫瘤組織中表達強度顯著高于正常組織，且腫瘤患者的Caveolin-1的表達水平與患者預后相關。說明Caveolin-1可能為前列腺癌診斷及預后提供新的依據。

綜上所述，本研究發現Caveolin-1在大部分前列腺癌組織中高表達(陽性率為70%)，提示其可能參與了前列腺癌的發生或發展。這不僅為研究前列腺癌的發病機制提供了線索，而且對前列腺癌的診斷和治療也具有一定的重要意義。該基因在前列腺及前列腺癌織中的具體作用及究竟如何發揮功能有待后續研究。

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