高效液相色譜法測定婦樂微丸中芍藥苷含量

林 海，吳建明，戴德雄，諸葛周

(1.浙江省臨海市第一人民醫(yī)院藥劑科，浙江 臺州 317000;2.浙江維康藥業(yè)有限公司，浙江 麗水 323000)

婦樂沖劑由忍冬藤、大血藤、甘草、大青葉、蒲公英、牡丹皮等10味中藥組方，具有清熱涼血、消腫止痛的功效，可用于治療盆腔炎、附件炎、子宮內(nèi)膜炎等引起的帶下、腹痛等婦科疾病。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗項目簡單[1]，無法有效控制其內(nèi)在質(zhì)量。筆者將原沖劑改成微丸，并采用高效液相色譜法對處方中牡丹皮和赤芍所含芍藥苷進行含量控制，為婦樂微丸的質(zhì)量控制提供了快速、簡便、準(zhǔn)確的測定方法。

1 儀器與試藥

島津液相色譜儀，LC Solution色譜工作站;Sartorius BP 211D型電子天平;USC-502型超聲波清洗器;TU-11901型紫外分光光度計。婦樂微丸(浙江維康藥業(yè)有限公司試制，僅供本試驗用，批號分別為 20090401，20090402，20090403，20090404，20090405);芍藥苷對照品(批號為110736-200526，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Zorbax SB-C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86);流速:1 mL/min;檢測波長:230 nm;柱溫:35 ℃;進樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

芍藥苷對照品易溶于甲醇中，故選用甲醇直接溶解，制成每1 mL含0.079 6 mg的溶液，即得對照品溶液。取本品裝量差異檢查項下的內(nèi)容物，研細，取1 g，精密稱定，置塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率25 kHz)30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密吸取濾液10 mL，置中性氧化鋁柱(12 mm×200 mm，中性氧化鋁3g)上，以甲醇-乙酸乙酯(1∶1)50 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇定容于10 mL容量瓶中，以微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。按工藝制備缺赤芍和牡丹皮的雙陰性微丸1.0 g，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗:分別取對照品溶液、陰性對照品溶液和供試品溶液，過濾進樣。色譜圖見圖1。可見，色譜基線平穩(wěn)，輔料、雜質(zhì)對測定無干擾。

線性關(guān)系考察:精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成不同質(zhì)量濃度的對照品溶液，搖勻，分別精密進樣0.019 9，0.039 8，0.079 6，0.159 2，0.238 8，0.398 0 μg，按擬訂的色譜條件進行分析，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)、對照品進樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合得回歸方程 Y=8×106X-4 204.6，r=0.999 7(n=6)。結(jié)果表明芍藥苷進樣量在0.019 9～0.398 0 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液 (0.079 6 g/L)10 μL，重復(fù)進樣測定峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD為0.99%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗:取批號為20090401的樣品1 g，共5份，精密稱定，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果平均含量為2.15 mg/g，RSD=1.72%(n=5)，方法重現(xiàn)性良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，8，12 h 時進樣測定。結(jié)果樣品中芍藥苷峰面積的 RSD為0.47%(n=5)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗:精密稱取樣品(批號為20090401，含量平均值為2.15 mg/g)適量，各6份，分別精密加入芍藥苷對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取5批樣品依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件測定，以外標(biāo)法計算樣品中芍藥苷的含量。結(jié)果批號為20090401，20090402，20090403，20090404，20090405的樣品中，每袋分別含芍藥苷8.60，8.84，8.98，8.94，8.80 mg。

3 討論[2-4]

曾查閱參考文獻，選用乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)、甲醇-0.5%磷酸二氫鉀溶液(35∶65)為流動相，流速1.0 mL/min，以Kromasil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)為分析柱，柱溫 35℃。結(jié)果以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動相可達到滿意的分離效果，芍藥苷峰已達基線分離，峰形對稱;缺赤芍和牡丹皮的陰性對照品對測定無干擾。

曾采用Kromasil C18柱和Zorbax SB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動相，二者均達到滿意的分離效果，芍藥苷峰與相鄰峰分離度大于1.5，理論板數(shù)以芍藥苷峰計算均大于3 500。

對樣品提取時間、提取方法進行了比較，結(jié)果超聲處理與加熱回流提取相比，兩者含量相當(dāng)，故選用超聲處理作為提取方法;還對提取時間(15，30，60 min)進行了考察，結(jié)果超聲處理30 min時芍藥苷基本被提取完全，故選擇提取時間為30 min。

[1]WS3-B-1541-93，中華人民共和國衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑(第八冊)[S].

[2]楊 松，靳寶峰，孫 玫，等.反相高校液相色譜法測定固本益腸片中芍藥苷的含量[J].中成藥，2001，23(11):794-795.

[4]郭五保，張秀芝，姚 華，等.HPLC法測定血府逐淤軟膠囊中芍藥苷與甘草酸的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2003，18(2):54-55.