司帕沙星眼用凝膠質(zhì)量控制方法研究

溫 堅(jiān) ，李 芳 ，汪德鳳 ，黃 娜 ，洪寶賢 ，林三清 ，夏敬民

(1.廣東省湛江市中心人民醫(yī)院，廣東 湛江 524037;2.湛江師范學(xué)院校醫(yī)院，廣東 湛江 524048;3.湛江師范學(xué)院制藥工程系，廣東 湛江 524048)

司帕沙星(sparfloxacin)是第4代氟喹諾酮類抗菌藥物。體外抗菌試驗(yàn)表明，司帕沙星對(duì)革蘭陽性菌、革蘭陰性菌以及厭氧菌均有廣譜強(qiáng)效的抗菌作用，特別是對(duì)第2代喹諾酮類藥物作用弱的肺炎球菌、支原體、衣原體、軍團(tuán)菌、結(jié)核桿菌以及非典型抗酸菌等也顯示出很強(qiáng)的抗菌活性。本品為強(qiáng)效殺菌劑，在最低抑菌濃度(MIC)以上時(shí)即可迅速殺菌，并對(duì)耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌等能達(dá)到與敏感菌相同的殺菌效果。體內(nèi)抗菌試驗(yàn)證明，司帕沙星對(duì)革蘭陽性菌如金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌感染小鼠的半數(shù)致死量分別為0.828，3.36，6.31 mg/kg，有效性為環(huán)丙沙星的5～10倍、氧氟沙星的3～7倍。該藥具有高效、組織分布廣、滲透性強(qiáng)、消除半衰期長(zhǎng)、療效確切、不良反應(yīng)少、生物利用度高等特點(diǎn)[1-3]，可有效治療呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)等感染性疾病，臨床應(yīng)用前景廣闊。目前開發(fā)的劑型有分散片等[4-6]，尚未見司帕沙星眼用凝膠劑的報(bào)道。根據(jù)臨床治療眼部感染性疾病的需要，筆者研制了司帕沙星眼用凝膠，凝膠由司帕沙星、卡波姆-940、甘油、丙二醇、羥苯乙酯等制成，現(xiàn)將其質(zhì)量控制方法報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Gold S53型紫外可見分光光度計(jì)(上海棱光技術(shù)有限公司);AY-120型分析天平(日本Shimadzu公司);pHS-25C型數(shù)字酸度計(jì)(上海鵬順科學(xué)儀器有限公司)。司帕沙星對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為130461-200501，含量為99.8%);司帕沙星原料藥(湖北健源化工有限公司，批號(hào)為090804，含量為99.82%);卡波姆-940(武漢合中化工生物有限公司，批號(hào)為20090902，規(guī)格為1 kg);甘油(湖南爾康制藥有限公司，批號(hào)為20090223);丙二醇、氫氧化鈉、冰醋酸和醋酸鈉(廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào)分別為20090302-1，20090204-2，20080612-1，20080715-1);試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

本品為淡黃色膠體。

2.2 鑒別

取供試品溶液進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在297 nm波長(zhǎng)處有最大吸收。本品顯有機(jī)氟化物的鑒別反應(yīng)[6]。

2.3 檢查

本品pH應(yīng)為7.5～8.0。其他檢查應(yīng)符合2010年版《中國(guó)藥典(二部)》中眼用凝膠的相關(guān)規(guī)定[6]。

2.4 含量測(cè)定

2.4.1 溶液制備

取醋酸鈉18 g，加冰醋液9.8 mL，再加純化水稀釋至1 000 mL，攪勻，即得pH為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液(溶劑A)。精密稱取司帕沙星對(duì)照品50 mg，置250 mL量瓶中，用溶劑A溶解并稀釋至刻度，攪勻，得對(duì)照品貯備液。精密稱取司帕沙星眼用凝膠3.0 g(約相當(dāng)于司帕沙星6 mg)，置100 mL燒杯中，加入0.1 mol/L氫氧化鈉液10 mL，攪拌使凝膠完全溶解，定量轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加入0.1 mol/L氫氧化鈉液溶解至刻度，搖勻，精密吸取5 mL，置50 mL量瓶中，用溶劑A溶解至刻度，搖勻，精密吸取稀釋液20 mL至100 mL量瓶中，用溶劑A溶解至刻度，搖勻，制成1 mL含司帕沙星約5 μg的供試品溶液。除司帕沙星外，按處方比例取卡波姆-940、甘油、丙二醇、羥苯乙酯等輔料，根據(jù)眼用凝膠的制備方法制備空白凝膠，精密稱取空白凝膠3.0 g，按樣品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.4.2 測(cè)定波長(zhǎng)選擇

取對(duì)照品貯備液，用溶劑A稀釋，制成每1 mL約含司帕沙星4 μg的溶液，照紫外分光光度法，以溶劑A為空白，在250～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。另外，分別取供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液，按上述方法進(jìn)行掃描，記錄3種溶液的紫外吸收光譜。結(jié)果見圖1。可見，輔料在255 nm左右波長(zhǎng)處有少量吸收，在297 nm波長(zhǎng)處無吸收，而司帕沙星在297 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選定297 nm為司帕沙星的含量測(cè)定波長(zhǎng)。輔料對(duì)司帕沙星的含量測(cè)定無干擾。

圖1 司帕沙星紫外分光光譜圖

2.4.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密吸取司帕沙星對(duì)照品貯備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 mL，分別置 100 mL 量瓶中，用溶劑 A 溶解至刻度，搖勻，配制成含司帕沙星 2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，14.0 μg/mL的系列溶液，以溶劑A為空白，在297 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，以吸光度(A)對(duì)質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=0.075 07 C+0.002 2，r=0.999 95(n=7)。結(jié)果表明，司帕沙星質(zhì)量濃度在2.04～14.28 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8 h 時(shí)在297 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算含量。結(jié)果的 RSD為0.43%(n=6)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn):精密吸取司帕沙星對(duì)照品貯備液適量，用溶劑A稀釋，制成低、中、高3種質(zhì)量濃度的溶液，分別在日內(nèi)和日間進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)質(zhì)量濃度測(cè)定5次。結(jié)果日內(nèi)的 RSD為0.78%(n=5)，日間的 RSD為0.97%(n=5)。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(批號(hào)為100930)6份，每份2 g，精密稱定，每2份為一平行樣;另按低、中、高量級(jí)取司帕沙星對(duì)照品共6份(2，4，6 mg各2份)，精密稱定，加入上述平行樣中，按供試品溶液制備方法操作，制成待測(cè)溶液，依法測(cè)定吸光度，將吸光度代入回歸方程計(jì)算司帕沙星的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 司帕沙星加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液并測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為100927，100928，100929的3批樣品中，司帕沙星含量分別為標(biāo)示量的99.64%，101.18%，100.42%。本品含司帕沙星(C19H22F2N4O3)應(yīng)為標(biāo)示量的90.0% ～110.0%。

3 討論

司帕沙星在0.1 mol/L氫氧化鈉溶液中可溶解，經(jīng)試驗(yàn)，以0.1 mol/L氫氧化鈉溶液為溶劑時(shí)，制劑輔料對(duì)本法測(cè)定有干擾，而以pH為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液為溶劑，制劑輔料對(duì)本法測(cè)定無干擾。在測(cè)定過程中，先用少量0.1 mol/L氫氧化鈉溶液溶解樣品，后用pH為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖液稀釋，可使主藥溶解完全，又使輔料不影響測(cè)定。采用紫外分光光度法測(cè)定主藥含量，操作簡(jiǎn)便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于司帕沙星眼用凝膠的質(zhì)量控制。

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