不同產地朱砂蓮中馬兜鈴酸A的含量比較

任華忠，萬 麗，王書林，王金鵬

(1.成都中醫藥大學峨眉學院，四川 峨眉山 614201;2.成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 611137)

朱砂蓮為馬兜鈴科馬兜鈴屬植物四川朱砂蓮 Aristolochia cinnabarina C.Y.Cheng et J.L.Wu的干燥塊根，是四川、廣西、云南和貴州習用的一種止痛中藥，古稱辟虺雷，歷代本草著作如《證類本草》《本草品匯精要》《本草綱目》以及《植物名實圖考》等均有收載[1]。朱砂蓮性寒，味苦、辛，具有清熱解毒、消腫止痛功效，臨床主要用于治療腸炎、痢疾、胃及十二指腸潰瘍、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、癰癤腫毒、外傷出血等。現代藥理學研究結果表明，朱砂蓮主要具有鎮痛作用，也具有消炎和解熱、抗癌、抗感染、增強機體免疫機能等方面的作用;但朱砂蓮及其制劑有明顯的腎毒性[2]，這與其含有的馬兜鈴酸類物質有關。筆者采用高效液相色譜法測定了不同產地朱砂蓮中馬兜鈴酸A的含量[3]，旨在為朱砂蓮的安全使用和質量標準的建立提供基礎性研究。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，包括自動脫氣機、自動進樣器、二元泵、柱溫箱、2993型紫外檢測器，Empower2 Chromatography Data Software色譜工作站(美國Waters公司);UV-2450型紫外-可見分光光度計(日本島津公司);KQ-250 B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。朱砂蓮藥材樣品8批，分別來源于四川省的馬邊彝族自治縣、崇州市、峨眉山市和重慶市的涪陵區、萬州區，各批次樣品經成都中醫藥大學峨眉學院鄔家林教授鑒定，為馬兜鈴科馬兜鈴屬植物四川朱砂蓮 Aristolochia cinnabarina C.Y.Cheng et J.L.Wu的干燥塊根，生長年限均為4年，加工方法均為蒸制;馬兜鈴酸A對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110746-200406);乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:水 -乙腈(70∶30);流速:1 mL/min;檢測波長:250 nm;柱溫:27℃。在此色譜條件下，各樣品溶液中的馬兜鈴酸A峰與其他組分峰能達到基線分離，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取馬兜鈴酸A對照品適量，加乙醇使溶解，制成質量濃度為0.073 g/L的對照品溶液。取本品粉末約1 g，精密稱定，精密加入甲醇-甲酸(98∶2)100 mL，稱定質量，回流90 min，放冷，再稱定質量，用甲醇-甲酸(98∶2)補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取濾液20 mL，水浴蒸干，殘渣用乙醇50 mL溶解，再用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取質量濃度為0.73 g/L的對照品溶液1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 mL，用乙醇稀釋并定容至 10 mL，進樣 10 μL，記錄色譜圖，測定峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標、馬兜鈴酸A進樣量(X)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=36 283.478 X+656 353.898，r=0.998(n=10)。結果表明，馬兜鈴酸A進樣量在730～7 300 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密量取馬兜鈴酸A對照品溶液，加乙醇稀釋至0.036 5 g/L。精密吸取該對照品溶液10 μL，連續進樣6次，測定馬兜鈴酸A峰面積，結果的 RSD為1.34%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取供試品溶液，室溫下放置，分別于 0，2，4，6，8，12 h時測定峰面積。結果6次測得的馬兜鈴酸A峰面積的 RSD為1.46%(n=6)，表明供試品溶液在12 h內穩定。

重復性試驗:取樣品約1 g，共6份，精密稱定，照供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量。結果6次測得的馬兜鈴酸A含量的 RSD為1.52%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:取樣品約0.5 g，共6份，精密稱定，分別置圓底燒瓶中，各精密加入一定量的馬兜鈴酸A對照品，照供試品溶液制備方法制備溶液，測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=6)

表2 不同產地朱砂蓮中馬兜鈴酸A的含量(n=3)

2.4 樣品含量測定

分別精密吸取對照品溶液和各批次供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定含量，結果見表2。

3 討論

從文獻報道和臨床應用的實際情況來看，馬兜鈴酸A是朱砂蓮致腎損害的主要毒性成分，且存在一定的量毒關系[4]。本試驗結果表明，不同產地朱砂蓮的馬兜鈴酸A含量有顯著性差異(P＜0.05)，其中含量較高的是栽培4年的峨眉山朱砂蓮，含量達0.241%，而各產地朱砂蓮的平均含量為0.206%。近年來，由于陸續有馬兜鈴科植物致腎損害的報道，朱砂蓮在藥用方面的價值不斷受到質疑[2]。動物實驗得出的馬兜鈴酸安全劑量為5 mg/kg，就本次試驗結果來看，對來自各主要產地的朱砂蓮如能合理使用(《中華本草》規定為研末內服，每次0.5～1 g，每日2次)，則其馬兜鈴酸攝入量遠低于中毒劑量[5]。考慮到朱砂蓮在西南各省民間使用歷史悠久，療效確切，筆者認為不宜對朱砂蓮及其制劑采取完全否定的態度;但作為已明確不良反應的藥物，應當慎重使用，可在藥品標準中注明使用禁忌和注意事項等內容，以免使用不當造成嚴重不良反應。

[1]鄔家林.朱砂蓮的考證[J].中藥材，1985，8(5):46.

[2]黃仁發，史 偉，吳金玉，等.朱砂蓮中毒致急性馬兜鈴酸腎病[J].藥物不良反應雜志，2007，9(6):412.

[3]路金才，韓 娜，杜曉曦，等.馬兜鈴酸的測定方法現狀分析[J].中草藥，2006，37(7):1 113.

[4]徐曉月，張陸勇，江振洲，等.馬兜鈴酸Ⅰ腎毒性的實驗研究[J].中國生化藥物雜志，2006，27(6):336.

[5]梅全喜，高玉橋，胡世林.應理性對待含馬兜鈴酸類中藥[J].中國藥房，2006，17(7):554.