NDRG1 蛋白在口腔鱗癌中的表達及意義*

何欣蓉，王 瓊，朱治鍵

(川北醫學院病理教研室，四川 南充 637000)

口腔鱗癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是頭頸部最常見的惡性腫瘤之一，近年來發病率呈上升趨勢，已證實其發生發展與多個基因的異常表達有關。分化相關基因NDRG1(N-myc downstream regulated gene-1，N-myc 下游調節基因-1)是1992 年Stantont 等［1］和Charron 等［2］在N-myc 敲除的小鼠胚胎組織中發現的，因受N-myc 的抑制而得名。NDRG1 定位于人染色體8q24.3，長約60kb，其mRNA 長3kb，編碼一個相對分子量為43 kDa 的蛋白質。NDGR1 mRNA 在人體組織中廣泛存在，包括消化系統、免疫系統、生殖系統和泌尿系統，但不同系統之間的轉錄水平有很大差異。NDRG1 蛋白大都在上皮組織表達［3］。NDRG1 在腫瘤組織中的作用有很大爭議。在有些腫瘤中表現為促進作用［4，5］，而有些腫瘤中又表現為抑制作用［6］。NDRG1 在口腔鱗癌中的表達情況未見報道，因此，我們通過免疫組化方法研究NDRG1蛋白在口腔鱗癌中的表達，初步探討NDRG1 與口腔鱗癌發生發展的關系。

1 材料與方法

1.1 材 料

選擇2007 年1 月－2010 年12 月期間川北醫學院附屬醫院病理科口腔鱗癌患者手術切除標本65例，所有病例術前均未經放療、化療。其中男性39例、女性26 例，男女比例為1.5 ∶1，年齡區間為(43 －70)歲，平均52 歲，＜60 歲28 例，≥60 歲37例，所有病例均證實為鱗狀細胞癌，其中高分化30例，中分化26 例，低分化9 例。根據國際TNM 分期，Ⅰ－Ⅱ期42 例、Ⅲ－Ⅳ期23 例。有淋巴結轉移22 例，無淋巴結轉移43 例。收集20 例正常口腔黏膜組織作為對照。

1.2 方 法

1.2.1 試劑:羊抗人多克隆NDRG1 抗體(N-19:sc-19464)，規格1.0ml，工作濃度1 ∶100，購于美國SANTA CRUZ 公司。SP 免疫組化染色試劑盒，二氨基聯苯胺四鹽酸(Diaminobenzidine，DAB)均購于福州邁新生物技術開發公司。

1.2.2 免疫組化染色方法:將原病理常規石蠟包埋的蠟塊作4μm 切片，每例作連續切片2 張，分別作HE 染色、NDRG1 免疫組織化學SP 法染色。各組織切片常規脫蠟及水化后，依次按說明書完成免疫組化染色各步驟。所有切片均在同一實驗室，由同一技術人員使用同一批號試劑完成免疫組織化學染色。用已知陽性對照片作陽性對照，用PBS 代替一抗作陰性對照。

1.2.3 結果判定:NDRG1 在胞膜或胞質中表達，每張切片檢測20 個高倍視野，按切片中顯色細胞的比例判定，免疫組化染色陽性細胞數＞10%，即記為陽性，否則為陰性。

1.2.4 統計學處理:應用SPSS11.5 軟件進行統計學分析，采用χ2檢驗分析口腔鱗癌組織與正常口腔黏膜組織中NDRG1 的表達，及口腔鱗癌組織中NDRG1 蛋白表達與臨床病理特征之間的關系，以p ＜0.05具有統計學意義。

2 結 果

2.1 NDRG1 在口腔鱗癌組織與正常口腔黏膜組織中的表達

免疫組化SP 法顯示NDRG1 蛋白的陽性信號主要表達在細胞漿內，部分在細胞膜上，為黃-棕褐色顆粒。20 例正常口腔黏膜組織中只有5 例NDRG1 蛋白陽性表達(圖1)，陽性表達率為25%(5/20)，65 例口腔鱗癌組織中48 例NDRG1 蛋白表達陽性(圖2)，陽性表達率為72.3% (48/65)，NDRG1 蛋白在口腔鱗癌組織中的表達與正常口腔黏膜組織中的表達差異具有顯著統計學意義(p ＜0.01)。

2.2 NDRG1 表達與口腔鱗癌臨床病理特征的關系

從表1 中可以看出，NDRG1 蛋白的表達與口腔鱗癌發生部位、性別、年齡均無相關性(p ＞0.05);而與口腔鱗癌分化程度、浸潤深度、分期及淋巴結轉移情況均具相關性(p ＜0.05)，NDRG1 蛋白在分化低、浸潤深、分期高及有淋巴結轉移的口腔鱗癌中表達高。

表1 NDRG1 的表達與口腔鱗癌患者臨床病理特征的關系

3 討 論

NDRG1 定位于人染色體8q24.3，長約60kb，其mRNA 長3kb，編碼一個相對分子量為43 kDa 的蛋白質。NDGR1 mRNA 在人體組織中廣泛存在。NDRG1 蛋白大都在上皮組織表達。現有文獻已經證實NDRG1 與細胞分化、器官成熟、組織缺氧、雌激素作用、抑癌基因p53 和PTEN 等有關［7－9］，并能被多種分化調節劑誘導表達［10］。目前對NDGR1 基因的功能認識還不完全清楚，其在腫瘤組織中的表達也存在很大爭議。在報道的文獻中，關于NDGR1與腫瘤的發生、發展、轉移和預后都有很多的研究。目前較多文獻報道，NDRG1 在很多腫瘤組織中表達上調，表現為促進作用，Wang 等［4］在結直腸腫瘤中發現，NDRG1 在結直腸腫瘤的發生、發展和轉移過程中可能起促進作用。而也有文獻報道，NDRG1 在腫瘤組織中表達下調，表現為抑制作用，Maruyama Y 等［5］發現NDRG1 蛋白高表達的NDRG1 cDNA 轉染胰腺癌細胞株侵襲能力顯著減少，表明NDRG1可能是一個腫瘤轉移抑制基因。

本研究采用免疫組織化學方法檢測了65 例口腔鱗癌組織和20 例正常口腔黏膜組織中NDRG1蛋白表達情況，發現NDRG1 蛋白在口腔鱗癌組織中高表達(陽性率為72.3%)，而正常口腔黏膜組織中低表達(陽性率為25%)，差異有顯著統計學意義(p ＜0.01)。同時，我們通過對65 例口腔鱗癌組織臨床病理特征與NDRG1 蛋白表達的相關性研究發現，NDRG1 基因的表達與癌組織分化程度、腫瘤浸潤深度、臨床分期及有無淋巴結轉移密切相關。分化程度低、浸潤深、分期高及有淋巴結轉移的患者，NDRG1 蛋白表達高，差異均具有統計學意義(p ＜0.05)，而與患者的發病部位、年齡、性別無明顯關系。這說明NDRG1 蛋白的表達可能參與了口腔鱗癌的發生、發展及浸潤轉移，但作用機制不清，還有待我們進一步去研究。同時，研究如何抑制NDRG1 基因表達及抑制其表達產物的功能有可能成為將來治療腫瘤的新方法。

［1］ Stanton BR，Perkins AS，Tessarollo，et al.Loss of N-myc function results in embryonic lethality and failure of the epithelial component of the embryo to develop［J］.Genes Dev，1992，6(12A):2235 －2247

［2］ Charron J，Malvnn BA，Fisher P，et al.Embryonic lethality in mice homozygous for a targeted disruption of the N-myc gene［J］.Genes Dev，1992，6(12A):2248 －22457

［3］ Lachat P，Shaw P，Gebhard S，et al.Expression of NDRG1，a differentiation-related gene，in human tissues［J］.Histochem Cell Biol，2002，118(5):399 －408

［4］ Wang Z，Wang F，Wang WQ，et al.Correlation of N-myc downstream-regulated gene 1 overexpression with progressive growth of colorectal neoplasm［J］.World J Gastroenterol，2004，(10):550－554

［5］ Akiba J，Ogasawara S，Kawhara A，et al.N-myc downstream regulated gene 1(NDRG1)/Cap43 enhances portal vein invasion and intrahepatic metastasis in human hepatocellular carcimonal［J］.Oncol Rep，2008，20(6):1329 －1335

［6］ Maruyama Y，Ono M，Kawahara A，et al.Tumor growth suppression in pancreatic cancer by a putative metastasis suppressor gene Cap43/NDRG1/Drg-1 through modulation of angiogenesis［J］.Cancer Res，2006，66(12):6233 －6242

［7］ Van Belzen N，Dinjens WN，Diesveld MP，et al.A novel gene which is up-regulated during colon epithelial cell differentiation and down-regulated in colorectal neoplasms［J］.Lab Invest，1997，77(1):85 －92

［8］ Stein S，Thomas EK，Herzog B，et al.NDRG1 is necessary for p53-dependent apoptosis.J Biol Chem［J］.2004，279 (47):48930 －48940

［9］ Bandyopadhyay S，Pai SK，Hirota S，et al.PTEN up-regulates the tumor metastasis suppressor gene Drg-1 in prostate and breast cancer［J］.Cancer Res，2004，64(21):7655 －7660

［10］ Piquemal D，Joulia D，Balagure P，et al.Differential expression of the RTP/Drg1/Ndr1 gene product in proliferating and growth arrested cell［J］.Biochim Biophys Acta，1999，1450(3):364 －373