HPLC同時測定喘舒片中5種蒽醌類成分的含量

王瑞芬， 郭海麗

(1.濮陽市食品藥品檢驗所，河南濮陽 457000;2.河南華峰制藥有限公司，河南濮陽 457000)

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀:515型高壓泵;2487紫外檢測器;N2000工作站。Precisa 92SM-202A電子分析天平，感量0.01 mg(普利賽因國際貿易(上海)有限公司)，KQ 2200超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品，批號分別為:110795-200806、0757-200206、 110756-200110、 110796-200513、110758-200509，均購自中國藥品生物制品檢定所;喘舒片批號為:20091202，20091203，20091204 河南華峰制藥有限公司;甲醇為進口色譜純(美國);水為重蒸水;其它試劑均為分析純。

2 試驗方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Lanbo? Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-0.3% 磷酸(80:20);檢測波長:254 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃;進樣量:20 μL;理論塔板數按蘆薈大黃素峰計均不低于7 000;分離度大于1.5。按以上色譜條件得到對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液色譜圖，見圖1。

圖1 喘舒片HPLC色譜圖

2.2 對照品溶液與供試品溶液的制備

對照品溶液的制備:分別精密稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品適量，置50 mL量瓶中，加甲醇制成含蘆薈大黃素46.8 μg/mL、大黃酸 49.0 μg/mL、大黃素 53.0 μg/mL、大黃酚116 μg/mL、大黃素甲醚73.8 μg/mL 的混合對照品溶液，備用。

供試品溶液的制備:取供試品20片，除去包衣，精密稱定，研細，取約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，置燒瓶中，蒸干，殘渣加水10 mL、鹽酸2 mL和三氯甲烷20 mL，加熱回流1 h，立即冷卻，分取三氯甲烷層，水層再用三氯甲烷振搖提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

測定法:分別精密吸取對照品和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 線性關系考察 分別精密吸取對照品混合液1、2、3、4、5 mL 置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取各濃度對照品混合液20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以進樣量為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得回歸方程。

實驗結果表明:蘆薈大黃素在進樣量0.093 6 μg～0.468 μg、大黃酸在進樣量 0.098 μg ～ 0.49 μg、大黃素在進樣量0.106 μg ～0.53 μg、大黃酚在進樣量0.232 μg ～1.16 μg、大黃素甲醚在進樣量0.147 6 μg～0.738 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.4 陰性對照試驗 準確稱取按處方比例除去大黃粉的其它藥材適量，依照喘舒片的制備工藝和供試品溶液的制備方法制得缺大黃粉的空白對照溶液，作為陰性對照液。按上述色譜條件測定，供試品色譜中5種待測成分色譜峰保留時間與相應對照品峰的保留時間一致，陰性對照色譜圖上在此保留時間無干擾。見圖1。

2.5 精密度試驗 精密吸取供試品溶液20 μL(批號為:20091204)，按上述色譜條件，平行進樣5次，根據峰面積，測得蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的 RSD分別為0.63%、0.62%、1.02%、0.82% 、1.14% 。

2.6 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12 h 進樣 20 μL，測定峰面積，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚峰面積RSD分別為 0.96%、1.04%、1.12%、1.06%、0.92%。結果表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.7 重復性試驗 取同一批次樣品5份，按供試品溶液制備方法制得供試品溶液，進樣20 μL，分析測定，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚峰面積的RSD分別為1.04%、1.34%、1.09%、1.32%、1.15%，表明重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的同一批號樣品(批號:20091204)約2.0 g，精確加入一定量對照品，按供試品制備項下方法操作，測定含量，計算回收率，結果見表1～5。

表1 蘆薈大黃素加樣回收率實驗結果

表2 大黃酸加樣回收率實驗結果

2.9 樣品含量測定 取樣品3批，按供試品制備項下方法制得供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，分別代入回歸方程，計算樣品中各組分含量，結果見表6。

表3 大黃素加樣回收率實驗結果

表4 大黃酚加樣回收率實驗結果

表5 大黃素甲醚加樣回收率實驗結果

表6 5種蒽醌類成分含量測定結果(n=3)

3 討論

本實驗參考文獻報道的蒽醌類成分含量測定方法，經大量試驗最終確定流動相為甲醇-0.3%磷酸(85:15)［9-10］，樣品中5種待測成分分離良好。

在試驗過程中，對樣品的前處理，曾先后采用超聲處理15 min、30 min、45 min 與加熱回流 30 min、1 h、2 h兩種方法，實驗結果表明超聲處理30 min，樣品中各待測成分已基本溶出。回流提取1 h和超聲提取30 min均可達滿意結果，考慮到超聲提取操作簡便，時間易于控制等優點，最終選定該方法為宜。

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