人參五味子湯和小青龍湯二步序貫治療對哮喘小鼠肺泡灌洗液 INF-γ、IL-4水平及氣道炎癥的影響

董翠香，曲政海，韓征利，劉秀美，周 立

(1臨淄區人民醫院，山東臨淄 255400;2青島大學醫學院附屬醫院)

支氣管哮喘目前尚無有效治療方法，吸入糖皮質激素也僅僅是減輕氣道炎癥、延緩氣道重塑的對癥治療措施。2010年 4月 ～2010年 5月，我們以人參五味子湯和小青龍湯為基本方，探討中藥二步序貫治療對哮喘小鼠氣道炎癥的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 卵清白蛋白(OVA)(美國 Sigma公司)，氫氧化鋁干粉(天津市天河化學試劑)，IL-4、INF-γELISA試劑盒(美國 RD生物制藥公司)，布地奈德(瑞典阿斯利康公司)，人參五味子湯，小青龍湯。

1.2 方法

1.2.1 中藥制備 制備人參五味子湯汁方劑:人參8 g，白術 6 g，茯苓 10 g，炙甘草 3 g，麥冬 10 g，五味子 3 g;藥物經冷水浸泡 30 min，陶器砂鍋武火煮沸后，文火煎 15 min，過濾，留取藥汁;藥渣加冷水煮沸后再熬 10 min，留取藥汁，2次藥汁約 100 ml，1 ml含生藥 0.40 g，裝入已消毒容器 4℃冰箱保存備用。小青龍湯汁方劑:麻黃、赤芍、防風各 9 g，細辛 3 g，甘草 4 g，半夏 8 g，五味子 3 g，桂枝 6 g;湯汁制備與人參五味子方法相同。

1.2.2 實驗方法 健康雌性 SPF級昆明系小鼠 40只，4～5周齡，體質量 16～18 g。隨機分為正常對照組、哮喘組、布地奈德組、二步序貫組，每組 10只。各組小鼠于 SPF級實驗動物房適應 10 d。①致敏階段:哮喘組、布地奈德組、二步序貫組分別于 0、7、14 d行腹腔注射 OVA混懸液 0.2 ml，正常對照組以PBS液替代。期間二步序貫組每日予以人參五味子湯 0.4 ml胃飼(含生藥 0.160 g)，正常對照組予以生理鹽水 0.4 ml胃飼。②激發階段:在最后 1次腹腔注射結束后 1周，將各組小鼠分別放入 30 cm×40 cm×30 cm自制霧化箱內，電動空氣驅動霧化1%OVA，每日 1次，每次 30 min，連續 9 d。正常對照組以 PBS替代。期間布地奈德組于激發前 20 min予以霧化布地奈德約 20 min;二步序貫組于激發前30 min分別予以小青龍湯 0.4 ml胃飼(含生藥0.204 g)。③病理檢查:最后一次霧化結束后 24 h內處死小鼠，眼球取血;打開胸腔，觀察肺臟的大體改變，選取左側肺臟，經 4%多聚甲醛固定液固定約24 h，脫水，石蠟包埋，制備厚 3μm的標準切片，待病理學檢查。

1.2.3 肺泡灌洗液 INF-γ、IL-4測定及氣道組織炎癥分級 INF-γ、IL-4測定嚴格按 ELISA試劑盒說明書進行操作，450 nm波長下測量各組的吸光度，并計算出對應的樣品濃度。氣道組織炎癥分級參照文獻[1]評定支氣管周圍的炎性細胞浸潤程度，共分 0～4級。

1.3 統計學方法 采用 SPSS17.0軟件，計量資料以±s表示，組間均數差異比較用單因素方差分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 體征變化 哮喘組、布地奈德組、二步序貫組小鼠激發吸入 1%OVA后出現抓耳撓腮、煩躁不安或俯伏不動、屎尿多，有的出現呼吸加深加快的表現，哮喘組較其它各治療組癥狀均較明顯。正常對照組霧化 PBS未見上述表現。哮喘組小鼠霧化 3 d后出現皮毛無光澤現象，正常對照組未出現。

2.2 氣道組織的肉眼改變 正常對照組小鼠的氣道組織顏色呈粉紅色，其他組小鼠的氣道組織較正常對照組略蒼白，其中哮喘組較明顯，有的出現黑色斑點或紋理，有的體積有不同程度增大。

2.3 肺泡灌洗液 INF-γ、IL-4水平測定及小鼠肺部炎癥浸潤程度 見表1。

表1 各組小鼠氣道炎癥及肺泡灌洗中 INF-γ、IL-4水平比較(±s)

表1 各組小鼠氣道炎癥及肺泡灌洗中 INF-γ、IL-4水平比較(±s)

注:與正常對照組比較，*P＜0.01，△P＜0.05

組別 n炎癥細胞浸潤(級)INF-γ(ng/L) IL-4(ng/L)正常對照組 10 0.8±0.42 527.01±23.21 152.02±5.93哮喘組 10 3.6±0.52* 272.71±13.71△ 232.85±5.42△布地奈德組 10 1.9±0.74* 374.81±19.63△ 162.44±7.79△二步序貫組 10 2.0±0.82* 510.63±29.16 167.89±4.77△

3 討論

研究表明，哮喘緩解期患兒存在 Th1/Th2調節失衡[2];進一步研究表明哮喘發作期患兒血清中代表Th1功能的 INF-γ水平降低，代表Th2功能的 IL-4水平明顯升高[3];同樣在哮喘大鼠肺泡灌洗液、血漿及淋巴液均有 IL-4水平升高及 INF-γ水平的降低[4]。以上說明，Th1/Th2失衡貫穿哮喘發病的始終，是哮喘發生發展的重要機制。

哮喘在中醫上也分發作期與緩解期，哮喘證候發作期分寒哮、熱哮、風哮和虛哮;緩解期為肺氣虧虛、脾氣虧虛和腎氣虧虛[5]。人參五味子湯出自清代名醫陳復正《幼幼集成》，具有益氣健脾、固衛養肺之效，主治“久嗽脾虛、中氣怯弱、面白唇白”及“咳而久不止”等病癥。對人參五味子湯進行現代藥理學研究證實，它不僅可以增強單核吞噬細胞的吞噬功能，誘生干擾素，增強機體免疫功能，并有止咳、平喘、祛痰等對癥治療作用[6]。吳振起等[7]認為人參五味子湯能明顯改善患兒免疫狀態，并增強患兒機體抗感染能力。小青龍湯出自張仲景《傷寒論》一書，是治療支氣管哮喘的有效經典名方。從現代藥理學上講，小青龍湯不僅改善肺部炎癥、改善哮喘癥狀還能調節機體的免疫失衡。張在其等[8]發現小青龍湯可選擇性降低哮喘小鼠肺組織內Th1/Th2數量，逆轉失衡的 Th1/Th2。張建國等[9]應用小青龍口服液治療支氣管哮喘，臨床上收到良好的效果。

本結果顯示，布地奈德及二步序貫組在小鼠激發階段癥狀較輕，兩組間小鼠肺部炎癥細胞浸潤程度比較無明顯差異，且較哮喘組明顯降低。各組肺泡灌洗液中 IL-4水平比較，哮喘組顯著升高;各組肺泡灌洗液中 INF-γ水平比較，發現各治療組均較哮喘組顯著升高外，二步序貫組同正常對照組差異無統計學意義，提示二步序貫治療在調節 INF-γ水平有其獨特之處。二步序貫治療可通過調節 Th1/Th2失衡有效地改善氣道炎癥，治療效果與吸入布地奈德相似，此為今后哮喘中藥序貫治療提供了理論基礎。

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