Peutz-Jeghers綜合征中 Brg1蛋白的表達及臨床意義

劉金霞，周 平，胡志民，趙 曉，時鳳敏，林艷華，毛高平

(1河北北方學院，河北張家口 075000;2中國人民解放軍空軍總醫院;3鄭州大學第二附屬醫院)

Brg1基因是 SWI/SNF基因家族的重要組成成分，是近幾年新發現的一種抑癌基因。本研究通過免疫組化方法檢測 Brg1蛋白在小腸癌組織、Peutz-Jeghers綜合征(PJS)息肉組織、正常小腸黏膜組織中的表達情況，探討 Brg1基因在 PJS發生、發展以及癌變中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇空軍總醫院病理科 2004年 4月 ～2010年 9月歸檔的蠟塊標本，其中 PJS息肉組織 72例，遠離瘤體的小腸黏膜以及正常小腸黏膜組織 12例，小腸癌組織 30例。病理切片均經 2位以上病理醫師確診。

1.2 方法 選取石蠟組織塊，脫蠟至水化后采用抗原修復處理的鏈霉素抗生物素蛋白 S-P法染色，DAB顯色。Brg1蛋白免疫組化檢測技術實驗步驟按說明書進行。S-P試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司，Brg1抗體購自北京博奧森生物技術有限公司，用已知陽性片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。結果判斷標準:Brg1染色陽性細胞為細胞核呈棕黃色至深褐色，部分細胞質同時為淡黃色和(或)黃色。其中陽性細胞 ＜25%為(-);25%～50%為陽性(+)，51%～75%為中等陽性(++)，＞75%為強陽性(+++)。

1.3 統計學方法 應用 SPSS17.0軟件進行統計分析，組間差別采用四格表χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

Brg1蛋白在 PJS息肉組織及正常小腸黏膜組織中均表達于細胞核，呈棕黃色至深褐色，多數部分細胞質同時為黃色。Brg1蛋白在小腸癌組織中為中等陽性或強陽性表達，在 PJS息肉組織中為中等陽性或弱陽性表達，在正常小腸黏膜組織中為弱陽性表達或不表達。Brg1蛋白的陽性表達在癌組織與PJS息肉組織之間差異有統計學意義(χ2=4.870，P＜0.05)，兩者列聯系數 C=0.206;PJS息肉組織與正常小腸黏膜組織比較差異也具有統計學意義(χ2=4.497，P＜0.05)。見表1。

表1 Brg1蛋白在 PJS息肉組織、小腸癌組織及正常小腸黏膜組織中的表達(例)

3 討論

PJS是一種常染色體顯性遺傳性疾病，以多發性胃腸道錯構瘤性息肉和皮膚黏膜的黑色素沉著為特征，因此又稱黑斑息肉綜合征和色素沉著綜合征，可發生在消化道的任何部位，是胃腸道和胃腸道外腫瘤并出現多種惡性腫瘤的高危因素[1]。目前對PJS的發病機制還不是很明確，一般認為 PJS是一種常染色體單基因顯性遺傳性疾病，在 PJS家系患者中 STK11的突變率為 70%，散發病例中的突變率為 30%～67%。這就意味著在家族性和散發性 PJS中除 STK11突變外還有其他致病基因的存在。有報道 STK11/LKB1與 Brgl蛋白相關，Brgl蛋白是SWI1-SNF2復合蛋白的成員，具有 ATP依賴的解旋酶活性，在 SWI1-SNF2核染色質改造功能中發揮重要作用，同時是許多基因復制所必需的蛋白[2]。而LKB1的 N末端區域(1-146堿基)是與 Brgl解旋酶結合區域，雖然 Brgl未被 LKB1磷酸活化，但在體外實驗中發現它的 ATP酶活性通過與 LKB1結合而增加，同時其阻滯細胞周期的作用也需要 LKB1的參與[3]。另外，在 p53依賴的凋亡 HT1080細胞中LKB1有過表達跡象，并且在纖維肉瘤細胞 HT1080裂解物中也發現 STK11/lKB1基因與 p53相耦聯，暗示兩者相關聯或者存在相關聯的蛋白。由此推測Brg1有可能是 PJS息肉發生發展的原因之一。

Murphy等研究發現，Brg1可以 E2F非依賴方式抑制 c-fos的轉錄[4，5]，表明它是一種重要的抑癌基因。另有研究發現，SWI/SNF家族與許多基因激活有關，也與轉錄抑制有關，它主要通過轉錄活化和抑制功能來控制腫瘤的生長[6]。不同的研究發現，Brg1基因在前列腺癌、宮頸癌及胃癌組織中高表達，而在肺癌組織及多種腫瘤細胞系中表達下調或缺失[7～10]。

本研究結果表明，Brg1蛋白在小腸癌組織和PJS息肉組織中高表達，二者陽性表達率明顯高于正常小腸黏膜組織，且 Brg1蛋白在小腸癌組織中的陽性率高于PJS息肉組織。Brg1蛋白在小腸癌中的表達以強陽性或中等陽性為主，在 PJS息肉組織中的表達以中等陽性或弱陽性為主，而在正常小腸黏膜組織中以弱陽性表達或不表達為主。由此可推測Brg1很可能是PJS息肉發生發展和息肉癌變的一個關鍵性因素之一。Brg1基因作為一種抑癌基因，在PJS息肉組織和小腸癌組織中卻表現為癌基因的活性，究其原因，可能是 Brg1基因在 PJS息肉組織和小腸癌組織中發生了功能丟失或轉錄激活作用，從而失去了原本的抑癌作用，進而在 PJS息肉發生發展及息肉癌變過程中起著一定的作用。

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