HPLC法測定鹽酸馬尼地平片中主藥的含量

蘭為民，徐炳欣，安衛平，王又新（.河南許昌市中心醫院，許昌市 46000；.河南許昌市藥品檢驗所，許昌市 46000）

鹽酸馬尼地平（Manidipine hydrochloride）為二氫吡啶類鈣通道拮抗藥，主要通過抑制血管平滑肌上L型鈣通道，抑制鈣離子內流，從而使血管平滑肌舒張，達到降壓目的[1，2]。臨床上鹽酸馬尼地平片主要用于治療高血壓合并2型糖尿病或者糖耐量降低的患者，是一種效果較好的心血管治療藥物[3，4]。藥物含量是評價藥品質量的重要指標之一，而目前尚未見用HPLC測定其含量的文獻報道。為保證鹽酸馬尼地平片的質量，實現臨床用藥安全可靠，筆者嘗試建立高效液相色譜法（HPLC）測定該制劑中主藥含量。結果表明，所建立的方法簡便、快速、準確、重復性好，可為建立其質量標準提供依據。

1 儀器與試藥

LC-15C型HPLC儀、SPD-M10Avp二極管陣列檢測器、LC-solution工作站（日本島津公司）；AR 1140型電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BP211D十萬分之一天平（德國Sartorius公司）。

鹽酸馬尼地平對照品（批號:090356.1，純度:＞99.9%）、鹽酸馬尼地平片（批號:20100928、20101013、20101027，規格:10 mg∶100 mg）均由許昌恒生藥業有限公司提供；甲醇、乙腈為色譜純，二氯甲烷、乙醇、磷酸氫二鉀均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Hypersil BDS C18（200 mm×4.6 mm，5 μm），流動相:乙腈-0.04 mol·L－1K2HPO4（35 ∶65，V/V）；流速:1.0 mL·min－1；檢測波長:228 nm；柱溫:室溫；進樣量:20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸馬尼地平對照品適量，置于100 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，得濃度為1.0 mg·mL－1對照品貯備液。

2.3 樣品溶液的制備

分別取3批鹽酸馬尼地平片各20片，精密稱重，然后將其置于干燥潔凈的研缽中研磨均勻；分別稱取相當于1片鹽酸馬尼地平的量（約0.12 g）置于100 mL容量瓶中，加入5 mL超純水初溶解后，邊搖邊加入20 mL無水乙醇，充分溶解后以超純水稀釋至刻度并搖勻，用0.45 μm油水兩用濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液即得。

2.4 空白對照溶液的制備

按鹽酸馬尼地平片劑處方比例混合各輔料，稱取相當于1片鹽酸馬尼地平片所用輔料（約0.12 g）置于100 mL容量瓶中，加入5 mL超純水初溶解后，邊搖邊加入20 mL無水乙醇，充分溶解后以超純水稀釋至刻度并搖勻，用0.45μm油水兩用濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液即得。

2.5 專屬性試驗

取空白對照溶液、鹽酸馬尼地平對照品溶液和樣品溶液進樣分析，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白對照溶液；B.對照品溶液；C.樣品溶液；1.鹽酸馬尼地平Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank control solution；B.control solution；C.sample solution；1.manidipine hydrochloride

2.6 線性關系考察

精密量取“2.2”項下對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得到對照品濃度分別為0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mg·mL－1的溶液；進樣，記錄峰面積值。以對照品濃度（X）為橫坐標，對照品峰面積（Y）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程:Y＝310714X+1354.2（r＝0.9994），表明鹽酸馬尼地平檢測濃度線性范圍為0.05～0.30 mg·mL－1。

2.7 精密度試驗

取“2.2”項下對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次，其峰面積的RSD為0.84%（n＝6）。

2.8 穩定性試驗

取“2.3”項下樣品溶液（批號:20100928）在室溫避光下放置，分別于0、2、4、8、12、24 h時測定含量。結果，樣品含量的RSD為0.21%（n＝6），表明樣品溶液在24 h內穩定性好。

2.9 加樣回收率試驗

取已知含量的、批號為20100928的鹽酸馬尼地平片20片，研磨均勻。精密稱取相當于平均片重的鹽酸馬尼地平粉末（約0.12 g）6份，分別精密加入鹽酸馬尼地平對照品適量，置于100 mL容量瓶中。加入5 mL超純水初溶解后邊搖邊加入20 mL無水乙醇，充分溶解后以超純水稀釋至刻度并搖勻，用0.45μm油水兩用濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液，按“2.1”項下試驗條件進樣分析，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.10 樣品含量測定

將3批樣品溶液分別按“2.1”項下試驗條件進樣，計算含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（%%，n＝3）Tab 2 Results of content determination for sample（s%%，n＝3）

3 討論

應用二極管陣列檢測器在線對鹽酸馬尼地平在190～400 nm波長范圍內掃描，發現其在228、240 nm波長處均有較強吸收。以240 nm為檢測波長，色譜峰峰形較差，基線波動明顯；而采用228 nm作為檢測波長，靈敏度更高，且基線平穩，峰形良好。

為了優化流動相，筆者在預試驗中分別考察了以甲醇-水系統、甲醇-磷酸鹽系統、乙腈-水系統、乙腈-磷酸鹽系統為流動相時的色譜行為，結果發現含有甲醇的流動相體系在檢測波長處有較大的本底吸收而使基線不穩；而采用乙腈加磷酸鹽的流動相體系，則能獲得良好的峰形，最終確定流動相為乙腈-0.04 mol·L－1K2HPO4（35∶65）。

有文獻[5]報道，鹽酸馬尼地平對光照不穩定，所以在制備對照品及樣品溶液時，需避光操作；在室溫避光條件下，樣品溶液在24 h內保持穩定。

[1]Mugellini A，Dobovisek J，Planinc D，et al.Efficacy and safety of delapril plus manidipine compared with enalapril plus hydrochlorothiazide in mild to moderate essential hypertension:results of a randomized trial[J].Clin Ther，2004，26（9）:1419.

[2]Roberto F.Rationale for use of the fixed combination of delapril and manidipine in the treatment of hypertension in patients with diabetes mellitus[J].Clinical Therapeutics，2007，29（2）:S54.

[3]Otero ML，Claros NM，Study Investigators Group.Manidipine versus enalapril monotherapy in patients with hypertension and type 2 diabetes mellitus:A multicenter，randomized，double-blind，24-week study[J].Clin Ther，2005，27（2）:166.

[4]Kang W，Lee DJ，Liu KH，et al.Analysis of benidipine enantiomers in human plasma by liquid chromatographymass spectrometry using a macrocyclic antibiotic（Vancomycin）chiral stationary phase column[J].Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2005，814（1）:75.

[5]謝 昕，王本杰，魏春敏，等.鹽酸馬尼地平的LC-MS法測定及藥動學[J].中國醫藥工業雜志，2007，38（9）:653.