玉溪市豬圓環病毒 2型血清學調查分析與防治

楊耀蘭,薛 濤,呂素珍,梁中樞,趙明麗,劉保有

(1.玉溪市動物疫病預防控制中心,云南 玉溪 653100; 2.玉溪市動物衛生監督所,云南 玉溪 653100;3.峨山縣動物疫病預防控制中心,云南 峨山 653200; 4.江川縣動物疫病預防控制中心,云南 江川 652600)

豬圓環病毒(Porcine circovirus,PCV)是迄今發現的一種最小的動物病毒,現已知 PCV有 PCV-1和 PCV-2兩個血清型,PCV-1為非致病性的病毒,PCV-2為致病性的病毒,是斷奶仔豬多系統衰竭綜合征(Postweaning Multisystemic Wasting Synd rome,PMWS)的主要病原。本病于 1991年首先在加拿大被發現,1996年暴發于世界許多國家。我國 2002年證實豬群中存在本病,臨床上主要表現為斷奶仔豬多系統衰竭綜合征和新生仔豬先天性震顫,母豬繁殖障礙等,并出現嚴重的免疫抑制,從而容易導致繼發或并發其他傳染病,被世界各國公認為最重要的豬傳染病之一。近年來,隨著玉溪市養豬業的發展,生豬及其產品大流通,種豬的大量引進等原因,PCV-2引起的豬圓環病毒病不斷發生,其流行情況也呈上升趨勢。為了解玉溪市豬群中PCV-2的感染、分布及流行情況,有效預防、控制豬圓環病毒病,減少該病給玉溪市養豬業帶來的經濟損失。筆者應用ELISA方法,自 2004～2009年期間,對玉溪市豬PCV-2感染情況進行血清學調查。

1 材料與方法

1.1 豬血清樣品

自 2004～2009年期間采自玉溪市 9個縣區,樣品總數為 2 478份,其中采集了 170個規模化養豬場(存欄 100頭以上)未免疫血清 1 606份,散養戶(飼養 10頭以下)309戶的未免疫血清 872份。血清于 -18°C保存備用。

1.2 診斷試劑

豬圓環病毒 2型抗體 ELISA檢測試劑盒,由武漢科前動物生物制品有限責任公司提供。

1.3 檢測儀器

Biocell2010酶標儀由鄭州博賽生物工程有限責任公司提供,單道可調微量加樣器,多道可調微量加樣器等。

1.4 檢測方法

①洗滌液配制:試劑盒使用前各種試劑平衡至室溫(25℃左右),用去離子水將洗滌液作 20倍稀釋備用。②樣品稀釋:在血清板中按 1∶40的體積稀釋待檢血清;陽性和陰性對照按 1∶4稀釋備用。③取檢測板用稀釋好的洗滌液洗板 2次,每次靜置 2m in后倒掉,再在干凈的吸水紙上拍干。④取稀釋好的血清樣品 10μL加入到檢測板中;陰性對照和陽性對照各設 2孔,每孔 100μL;輕輕振勻孔中樣品,置 37℃溫育 30min。⑤甩掉板中的溶液,用洗滌液洗板 3次,200μL/孔,每次靜置 3min,倒掉,再在干凈的吸水紙上拍干。⑥每孔加酶標二抗 100μL(抗豬IgG-HRP結合物),置37°C溫育 30min。⑦洗滌 5次,方法同⑤。⑧每孔先加底物液 A 1滴(50μL),再加底物液 B 1滴(50μL),混勻,室溫避光顯色 10m in。⑨每孔加終止液 1滴(50μL),10min內在酶標儀上測定結果。

1.5 結果判定

在酶標儀上測各孔OD 630值。試驗成立的條件是陽性對照孔平均 OD 630值大于或等于 1.0,陰性對照孔平均OD 630值必須小于 0.3。樣品 OD630值大于 0.42,判為陽性;樣品 OD630值在 0.38到 0.42之間,判為可疑;樣品OD 630值小于 0.38,判為陰性。

2 結果

2.1 玉溪市 2004～2009年抽檢的 2 478份血清樣品 PCR-2抗體檢測結果

陽性率從 2004年的 5.03%逐年上升到 2009年的31.23%,并且呈逐年上升的趨勢(見表 1)。

表 1 玉溪市PCV-2各年度血清學檢測結果

2.2 不同養殖方式豬群的圓環病毒 2型抗體檢測結果(見表2)

(1)同一年度不同飼養方式陽性率情況:由表 2的結果經 t檢驗得出,2004年和 2005年的散養戶與規模場陽性率差異不顯著(P＞0.05);2006年、2007年、2008年散養戶與規模場陽性率差異極顯著(P＜0.01);2009年散養戶與規模場陽性率差異顯著(P＜0.05)。

(2)不同的飼養方式豬PCV-2陽性率差異性很大。規模場陽性率 6年總平均值為 26.90%,散養戶陽性率 6年總平均值為 8.14%,相差 18.76個百分點。規模豬場陽性率較高,其中 2006～2009年陽性率在 25%～50%。散養戶陽性率在 4%～10%,到 2009年有較大增加,達 19%。

2.3 種豬與育肥豬圓環病毒病 2型檢測結果(見表 3)

表 3 種豬與育肥豬PCV-2感染情況檢測結果

由表 3結果經 t檢驗得出,同年度比較 2004年種豬與育肥豬陽性率差異不顯著(P＞0.05),2005年、2006年、2007年、2008年、2009年種豬與育肥豬陽性率差異極顯著(P＜0.01);6年合計比較:種豬陽性率 6年總平均值為 37.19%,育肥豬陽性率 6年總平均值為 7.63%,相差 29.56個百分點,陽性率差異極顯著(P＜0.01)。不同年度之間比較,種豬和育肥豬陽性率都呈逐年上升趨勢。

3 分析與討論

(1)通過玉溪市 2004～2009年對豬圓環病毒病 2型感染情況的調查結果表明,玉溪市 9縣(區)都存在 PCV-2感染,表明豬圓環病毒病在玉溪市已廣泛存在。感染率從 2004年到 2009年呈逐年上升的趨勢。

(2)從不同飼養方式的豬PCV-2感染檢測情況來看,規模化養豬場的豬群感染率明顯高于散養戶,并且差異顯著。規模養豬場和散養戶分年度的感染率都呈逐年上升的趨勢。隨著生豬交易頻繁,農村散養戶存在暴發流行該病的隱患。不同規模豬場陽性率在 10%～70%不等,這可能與各豬場的飼養管理、其它疫病預防等有關。

(3)種豬的感染率明顯高于育肥豬,這可能與近幾年大量引入種豬,又不進行檢疫、凈化有關。另外,不同品種、不同日齡的豬群均有感染。

4 防治

豬圓環病毒病目前無特效的治療方法,除加強飼養管理,提高營養水平,注意環境衛生及消毒等綜合防治措施外,筆者就該病的防治,提出以下幾點建議:

(1)清除帶毒豬,凈化豬場。一旦發現可疑病豬,應立即隔離,加強消毒,切斷傳播途徑,杜絕疫情傳播。

(2)把好引種關,做好引入種豬的檢疫和隔離消毒工作,隔離、淘汰陽性種豬。

(3)豬圓環病毒病易與其它病原混合感染或繼發多種細菌感染,所以要做好相關疫病的疫苗接種,減少混合感染。加強飼養管理,控制繼發感染,提高豬群的免疫能力,做到早預防、早發現、早治療。

(4)藥物防治:該病重在預防,應在未發病之前使用藥物進行預防。當豬群發病時,治療效果一般不理想,可根據發病豬混合感染的具體情況,選用阿莫西林、氟苯尼考等抗菌素配合使用清熱解毒類中藥制劑及有免疫增強作用的黃芪多糖等藥,進行肌肉注射,連續治療 5～7 d,同時在飲水或飼料中投入免疫增強劑(黃芪多糖)、復合電解多維、葡萄糖等進行飲水 1周,達到控制繼發感染,降低應激反應,提高豬體抵抗能力,降低發病死亡比例的目的。