普洱市豬偽狂犬病的流行病學調查與分析

黃文忠,彭海生,魯富有,張喬明

(1.云南省動物疫病預防控制中心,云南 昆明 650051; 2.普洱市動物疫病預防控制中心,云南 普洱 665000)

豬偽狂犬病(Pseudorabies,PR)是由皰疹病毒科(Herprioviridae)皰疹病毒屬(Herpesvirus)偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus)引起的一種多種動物感染和發病的傳染病。PRV感染豬主要通過母豬胎盤和公豬精液垂直傳播,同時也可水平傳播[1]。該病可引起種公豬的不育、妊娠母豬的流產、產死胎和木乃伊胎,可引起新生仔豬的大量死亡而造成養豬業的較大經濟損失。PR由 Au jeszky(1902年)在匈牙利確定為一種獨立的疫病。本病發生于整個歐洲,對牛、豬飼養業帶來很大損失。我國自 1947年首次報道該病以來,目前已擴散至全國的十幾個省市,并給當地的養豬業發展也造成了巨大的經濟損失[2-8]。近年來普洱市養豬業有了長足的發展,2003年到 2007年,生豬飼養量由 180.4萬頭增加到 210.7萬頭,增長 16.80%。但隨之而來的是普洱市的豬病疫情也變得越來越復雜。本研究旨在通過開展豬偽狂犬病的流行病學調查及血清學研究,揭示該疫病的三間分布規律,分析疫病成因,掌握疫病的發生現狀及特點,進行疫病風險評估并提出防制對策,為提高普洱市防控豬偽狂犬病的整體能力提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 血清

隨機采集臨床上無異常癥狀豬血清,高速離心后,分離血清冷藏(冷凍)待檢。

1.2 檢測試劑

PR乳膠凝集試劑盒、偽狂犬病gE鑒別酶聯(ELISA)試劑盒均由華中農業大學牧醫學院動物病毒室生產,武漢科前動物生物制品有限公司提供。其中PR乳膠凝集試劑盒批號為:200401、060821、060802、070301;偽狂犬病 gE鑒別酶聯(ELISA)試劑盒批號為:200404、200506、200602、200703。

1.3 方法

1.3.1 疫病監測點設置

依托景東、鎮沅、景谷、墨江、寧洱、思茅、西盟等 7個縣(區)獸醫站設置疫病監測點;瀾滄、孟連、江城等 3家邊境動物疫情監測站設置邊境疫病監測點。

1.3.2 試驗基點

在縣(區)獸醫站豬場、有關縣相對較大的個體養豬戶等設置中型場試驗點;相對較小的景東、鎮沅、景谷、墨江、寧洱、思茅、西盟、江城、瀾滄、孟連 10縣(區)個體養豬戶等設置小型豬場和散養戶試驗基點。

1.3.3 養豬模式的劃定

根據普洱市養豬狀況,將全市養豬模式劃定為散養戶(10頭以下)、小型養豬場(10～50頭)、中型養豬場(50～200頭)三類來進行研究。

1.3.4 檢測方法

檢測目的物為自然感染豬偽狂犬病毒抗體。所采血清全部用豬乳膠凝集試劑盒進行檢測,對已使用豬偽狂犬病基因缺失滅活苗免疫但仍有繁殖障礙記錄的豬場血清用豬偽狂犬病 gE鑒別 ELISA診斷試劑盒進行再次檢測。

1.3.4.1 豬偽狂犬病乳膠凝集試驗 取待檢樣品(血清)、陽性血清、陰性血清、稀釋液各 1滴,分置于潔凈載玻片上,各加乳膠抗原 1滴,用牙簽混勻,攪拌并搖動 1～2min,于3～5min內觀察結果。根據以下標準判定結果:“++++”全部乳膠凝集,顆粒聚于液滴邊緣,液體完全透明;“+++”大部分乳膠凝集,顆粒明顯,液體稍渾濁;“++”約 50%乳膠凝集,但顆粒較細,液體較渾濁;“+”有少許乳膠凝集,液體呈渾濁;“-”液滴呈原有的均勻乳狀;以出現“++”以上凝集者判為陽性凝集。確定陽性血清加抗原呈“++++”;陰性血清加抗原呈“-”,抗原加稀釋液呈“-”,試驗結果方可成立,否則應重試。

1.3.4.2 豬偽狂犬病gE鑒別ELISA按照試劑盒說明書進行操作 取已包被好的酶標板,洗滌液洗板 3次,200μL/孔,最后一次拍干,除空白對照孔外,每孔加入以樣品稀釋液 1∶40稀釋的待檢樣品 100μL。同樣 1∶40稀釋對照血清,設陽性對照 2孔,陰性對照 3孔,空白對照不加,輕輕振勻孔中樣品(勿溢出),置 37℃溫育 30min。

甩掉板孔中的溶液,洗滌液洗板 3次,200μL/孔,最后一次拍干。每孔加酶標二抗 100μL,置 37℃溫育 30 min。洗滌液洗板 3次,200μL/孔,最后一次拍干。每孔加底物A液、B液各 1滴(50μL),室溫避光顯色 15min。每孔加終止液 1滴(50μL),15min內測定結果。結果判定。以空白孔調零,在酶標儀上測各孔 OD 630值,其陽性對照孔 OD 630值≥0.4,陰性對照 OD 630值低于 0.1時,則按 0.1計算。根據公式:樣品孔 OD 630值/陰性孔 OD 630值≥2.1為 gE蛋白抗體陽性,介于 1.9～2.1為可疑,小于 1.9為陰性。

1.4 統計方法

數據采用卡方檢驗。

2 結果與分析

2.1 PR流行情況監測(見表 1)

對表 1中 2003～2007年 PR流行情況監測縣(區)數、村(場)數、監測數、陽性數、陽性率作 x2檢驗,結果 2006年、2007年較 2003年、2004年、2005年 PR流行陽性率差異顯著(P＜0.05),表明全市豬PR陽性率總體上呈上升趨勢,2007年達到 16.38%。

表 1 2003～2007年 PR流行情況監測統計

2.2 PR流行狀況時間分布(見表 2)

表 2 2003～2007年 PR流行狀況時間分布

對表 2中 2003～2007年 PR流行狀況各月份分布作 x2檢驗,結果 4月、5月、6月、7月、8月、9月對其它各月差異顯著(P＜0.05),表明全市豬 PR流行高峰出現在 4～9月,占77.95%。

2.3 PR流行狀況空間分布(見表 3)

表 3 2003～2007年 PR流行狀況空間分布

對表 3中 2003～2007年 PR流行狀況空間分布作 x2檢驗,結果江城縣較墨江、景東、思茅、鎮沅、瀾滄 5縣(區)PR流行狀況空間分布陽性率差異極顯著(P＜0.01),西盟、孟連、景谷、寧洱 4縣較墨江、景東、思茅、瀾滄 4縣區 PR流行狀況空間分布陽性率差異顯著(P＜0.05),表明全市豬PR流行陽性率最高的是江城,其次是西盟、孟連、景谷、寧洱等生豬生產縣,陽性率較低的是墨江、景東、思茅、瀾滄、鎮沅等養豬縣。

2.4 PR流行狀況群間分布

2003～2007年全市豬 PR共累計檢出陽性樣品 381份,其中:散養戶 68份,占全市 PR陽性樣品總數的 17.85%;小型養豬場 127份,占 33.33%;中型養豬 場 186頭,占48.82%。對PR流行狀況群間分布作 x2檢驗,結果中型養豬場對散養戶差異極顯著(P＜0.01),小型養豬場對散養戶差異顯著(P＜0.05),表明全市豬PR在中、小、散養戶豬群中流行程度從重到輕,流行程度與養殖規模關系密切。

2003～2007年的流行病學調查結果表明,豬PR是危害普洱市豬群的重要疫病之一。

3 討論

3.1 普洱市規模豬場疫病的三間分布

3.1.1 時間分布特點

豬 PR流行高峰出現在 4～9月(占 77.95%)。這與普洱市這一時期氣溫升高,生豬存欄量多,飼養密集以及鼠類活動活躍有關。

3.1.2 空間分布特點

江城縣豬 PR病流行陽性率最高,其次是西盟和孟連,這是因為這些縣生豬的飼養周期過長(有的農戶飼養生豬長達1～2年),大大增加了個體生豬感染PR病的機會。而景谷、寧洱等生豬生產縣豬 PR陽性率中等是由于這兩縣多年來從市外引入杜洛克、約克等種豬進行品種改良時,未經過嚴格的 PR檢疫,種豬通過精液將該病逐步擴散,特別是這兩縣養殖戶養殖技術相對較高,飼養數量密集,生豬的飼養周期較短,但基本未進行過 PR疫苗免疫保護的緣故。墨江、鎮沅、瀾滄 PR陽性率較低是因為這 3個縣的養殖戶地處偏遠山區,交通不便,PR的擴散程度相對緩慢。景東、思茅等養豬縣PR陽性率較低是因為這兩縣壩區的部分規模養殖戶近年來開始使用 PR的滅活疫苗對豬群進行不同程度的免疫,以及山區養殖戶分散飼養等有關。

3.1.3 群間分布特點

豬 PR的群間分布,散養戶發病率最低為 17.85%,小型養殖場次之為 33.33%,中型養殖場較高為48.82%。流行病學調查和監測情況顯示,發生PR疫病群間分布以散養戶、小型規模養豬場多發,中型規模豬場以PR繁殖障礙類疫病為主。這表明豬群發病與其飼養規模關系密切,散養戶豬群發病次數明顯多于中型和小型規模豬場,究其原因主要是散養戶飼養管理和疫病防治技術水平比中型、小型規模養豬場差。PR的監測說明本病與豬群的飼養時間長短、飼養數量等因素有關。

3.2 普洱市豬PR防制對策

(1)普洱市中、小型豬場應加強飼養管理和引種豬時進行 PR檢疫,定期進行監測,撲殺淘汰 PR野毒感染豬并經常進行消毒和消滅鼠害。

(2)根據普洱市豬 PR流行情況,依照免疫程序應重點加強寧洱、景谷兩縣以及其它各縣中、小型豬場的豬PR免疫接種 。其免疫程序為:未感染 PR的豬用豬 PR弱毒凍干疫苗免疫接種。種豬每頭肌注 4頭份,乳豬每頭肌注 1頭份,其它豬每頭肌注2頭份,乳豬斷奶后加強免疫 1次。

(3)發生 PR疫情的豬場應將臨床觀察疑似未受感染的母豬和仔豬以及妊娠母豬與已受感染的豬隔離管理,以避免機械傳播,并進行 PR疫苗緊急免疫;發生 PR的豬舍地面、墻壁、設施及用具每隔 2～3 d消毒 1次;對 PR帶毒豬要進行淘汰,PR病死豬要進行無害化處理。

4 結論

(1)全面、系統地進行 PR流行病學調查和自然感染病毒抗體監測,界定PR是當前對普洱市養豬業危害嚴重的重要疫病種類之一。發現現階段流行的PR主要臨床表現形式以繁殖障礙和疫病發生引起一定數量新生仔豬發病、死亡為特點。

(2)時間、空間及群間分布現狀及流行病學特點,總體上顯示出 PR主要發生于中型和小型養豬場,部分縣散養戶 PR的陽性率偏高可能與豬的飼養時間較長有關。

(3)普洱市豬群疫病時間、空間及群間分布現狀及流行病學特點,總體上顯示普洱市豬 PR的防制模式是重點加強中、小型豬場飼養管理和引種檢疫;定期監測,撲殺淘汰野毒感染豬;經常性消毒和嚴格按免疫程序進行預防接種;豬場周圍經常性滅鼠為主要內容的綜合防制措施。

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