應用EP7-A2方案評價循環酶法同型半胱氨酸試劑對其他生化檢測項目的干擾

熊聲賀 王琴琴 黃新城

（南昌大學第三附屬醫院 江西南昌330008）

高同型半胱氨酸（HCY）被認為是心腦血管疾病的獨立危險因素[1]，其實驗室檢測和臨床應用[2]日趨受到廣大專家學者的關注。經典的HCY檢測方法為熒光偏振法，因該法需要專用的儀器設備，限制了該項目的臨床應用范圍，近年來，隨著循環酶法同型半胱氨酸試劑研制成功，實現了HCY在生化分析儀上的快速、方便檢測。我們在引進該檢測項目過程中，發現循環酶法同型半胱氨酸試劑對生化分析儀上部分檢測項目存在不同程度的干擾，為此我們就HCY試劑對常見生化項目的干擾效應進行了評估。現報告如下：

1 材料與方法

1.1 儀器 日立7600-010全自動生化分析儀，儀器經過廠商校驗評估，樣本針攜帶污染率0.028%，小于0.5%；總攜帶污染率高→低為0.030%，低→高為-0.481%，小于2.0%；滿足儀器廠商技術要求。

1.2 試劑 本實驗室常用項目試劑ALT、AST、TBIL 、DBIL、BUN、CREA、UA、HDL-C 均來源于上海紫興生物科技有限公司，其中ALT、AST、BUN均采用速率法檢測，TBIL、DBIL采用釩酸鹽氧化法檢測，CREA、UA采用酶顯色法檢測，HDL-C采用單克隆抗體抑制-膽固醇氧化酶（一步法）法檢測；TCHO、TG試劑來源于溫州維日康科技有限公司，均采用氧化酶法檢測；GSP試劑來源于浙江伊利康生物科技有限公司，采用NBT還原法檢測；HbA1c試劑來源于日本積水醫療株式會社；以上項目使用的校準品分別來自瑞士羅氏公司及浙江伊利康、日本積水醫療等公司配套使用產品。同型半胱氨酸檢測試劑來源于臺灣臺塑生醫科技有限公司，批號：SP10C61，內含配套校準品和質控品。

1.3 方法

1.3.1 樣本及準備 樣本選自本實驗室內當天分析檢測剩余血清樣本約100 mL，選用有適量膽紅素（即黃疸）的樣本，將選擇的血清樣本混合均勻，以3 000 rps速度離心，取上清液對半分為2份，密閉暫存備用。

1.3.2 樣本基礎數據檢測 取上述處理好的樣本1份分成20小份，在日立7600-010全自動生化分析儀上檢測上述常用項目，檢測項目均經過適當的校準并且質量控制合格，按檢測項目的方式進行，即所有樣本檢測完一個項目后，再用同一樣本檢測其他項目，目的為避免不同項目間引入的交叉污染。

1.3.3 干擾試驗 從另1份血清樣本中取2份各5.0 mL，分別按0.5%的體積加入同型半胱氨酸試劑1（R1）和試劑 2（R2），然后再用剩余的基礎血清稀釋上述兩份樣本，使其加入物含量均分別為0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%，充分混勻后上機檢測上述常用項目，按基礎數據樣本檢測方式測定樣本，每樣本連續重復測定3次。

1.4 統計學方法 上述所有樣本測試數據，采用SPSS10.0軟件統計分析。

2 結果

見表 1、表 2。

表1 基礎數據與干擾試驗測試數據比較

表2 干擾物加入量與被干擾檢驗項目結果偏倚的劑量效應

3 討論

本實驗研究干擾物加入量，按探針最大允許攜帶0.5%量進行模擬，實驗數據統計和分析中扣除稀釋效應，按照 CLSI EP7-A2 評價方案要求[3～4]，并力求避免試劑探針和攪拌棒的攜帶污染，采用了按項目連續重復檢測的方法。統計結果顯示：不同的測試項目受HCY試劑不同組分干擾效應各不相同，造成的數據偏倚有正負之分，劑量效應也有大小差別。同型半胱氨酸檢測試劑對常用5個項目檢測結果產生影響，究其原因，與其試劑組方應有很大關系，因其R1中含有較高濃度的還原劑、R2中含有高濃度的氧化劑，其對檢測系統的內源性污染造成部分敏感項目結果偏倚增大。據報道NADH氧化酶檢測體系對氧化劑敏感[5]，而UA、GSP檢測體系對還原劑敏感[6]。另R2中可能含較高濃度鎂鹽或影響鎂鹽檢測的成分。

生化分析系統中分析項目間的交叉污染問題，近年來受到較多學者關注[7～8]，而象我們研究的這種千分之幾的污染物，引起百分數位檢測物含量變化，更應仔細研究和探討。更有可能有部分生化分析系統攜帶污染率可能高達百分之十幾或幾十，其結果報告給臨床醫療可能帶來災難性后果。生化分析系統中反應性交叉污染的機制和效應，是一個很深層次的系統問題，建議有研究條件的學者應重點關注。

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