秦川通痹顆粒質量標準研究

2011-05-02 03:01:54李俊平姜明章馮景輝孫大勇

藥學研究 2011年5期

李俊平，姜明章，馮景輝，孫大勇

(煙臺大洋制藥有限公司，山東煙臺 265500)

秦川通痹顆粒(3 g/袋)是由秦川通痹片改變劑型而來，秦川通痹片(0.3 g/片)收載于國家藥品監督管理局·國家中成藥標準匯編經絡肢體腦系分冊中［標準號:WS－10318(ZD－0318)－2002］。秦川通痹顆粒由秦艽、川芎、威靈仙、桂枝、獨活、木瓜、黃芪、干姜、牛膝、當歸、蒼術、甘草十二味中藥材制備而成，具有祛風除濕、通絡止痛的功效。用于風寒濕痹所致的肢體疼痛、麻木拘攣。為保證本制劑的療效，控制制劑的質量，對其質量標準進行了研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 UV－1700型紫外分光光度計(島津(香港)有限公司);島津LC－10AT高效液相譜議，SPD－10A檢測器，Phenomenex ODS C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)。

1.2 試藥秦川通痹顆粒(本廠自制，批號:070108，070109，070110)，硅膠G(青島海洋化工廠);甲醇(USA色譜純);龍膽苦苷對照品(批號:110770—200308，供含量測定用)、齊墩果酸對照品(批號:110709－200304)、黃芪甲苷對照品(批號:110781－200311)、川芎對照藥材(批號:120918－200406)、甘草對照藥材(批號:120904－200410)、當歸對照藥材(批號:120927－200411)，以上對照品、對照藥材均由中國藥品生物制品檢定所提供。其余試劑均為分析純。

2 實驗內容

2.1 鑒別研究

2.1.1 當歸、川芎的鑒別取本品15 g，研細，加乙醚60 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作為供試品溶液。另按本標準的處方量及制法制備缺當歸、川芎的陰性對照樣品，按上述供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。另取川芎、當歸對照藥材各1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述4種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照溶液在相應的位置無此斑點，證明陰性無干擾，見圖1。

圖1 當歸、川芎的鑒別

2.1.2 黃芪的鑒別取本品30 g，研細，加甲醇100 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用10%氫氧化鈉溶液洗滌2次，每次20 mL，棄去堿液，再用正丁醇飽和水洗滌2次，每次30 mL，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5 mL使溶解，作為供試品溶液。另按本標準的處方量及制法制備缺黃芪的陰性對照樣品，按上述供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。分別置日光及紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點;紫外光燈下顯相同的橙黃色熒光斑點。陰性對照溶液在相應的位置無此斑點，證明陰性無干擾。見圖2。

圖2 黃芪的鑒別

2.1.3 齊墩果酸的鑒別取本品40 g，研細，加乙醇100 mL，加熱回流1 h，濾過，加鹽酸4 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至約5 mL，加水15 mL，用三氯甲烷振搖提取2次，每次20 mL，分取三氯甲烷液，蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另按本標準的處方量及制法制備缺威靈仙、木瓜、牛膝的陰性對照樣品，按上述供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。另取齊墩果酸對照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－丙酮(2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，分別顯相同的紫紅色斑點或相同顏色的熒光斑點。陰性對照溶液在相應的位置無此斑點，證明陰性無干擾。見圖3。

圖3 齊墩果酸的鑒別

2.1.4 甘草的鑒別取本品20 g，研細，加乙醚100 mL，加熱回流2 h，濾過，棄去乙醚液，藥渣揮干，加甲醇50mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，用正丁醇飽和水洗3次，每次20 mL，棄去水洗液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，加活性炭少許，搖勻，放置30 min，濾過，濾液濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。另按本標準的處方量及制法制備缺甘草的陰性對照樣品，按上述供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。另取甘草對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一以1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點。陰性對照溶液在相應的位置無此斑點，證明陰性無干擾。見圖4。

2.2 龍膽苦苷含量測定本品由秦艽、川芎、威靈仙、桂枝、獨活、木瓜、炙黃芪、干姜、牛膝、當歸、蒼術、甘草十二味中藥組成，具有祛風除濕，通絡止痛的功效。用于風寒濕痹所致的肢體疼痛，麻木拘攣。秦艽為本品君藥，其主要有效成分為龍膽苦苷，所以選擇以龍膽苦苷的含量為指標對本品質量進行控制。原秦川通痹片標準中采用薄層掃描法測定其含量，考慮到薄層掃描法的局限性，建立了高效液相色譜法測定龍膽苦苷含量的方法，試驗證明該方法準確度、精密度高，重現性好，可用來控制本品的質量。

色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇－水(30∶70)為流動相;檢測波長為254nm。理論板數按龍膽苦苷峰計算應不低于3000。

對照品溶液的制備精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。

圖4 甘草的鑒別

供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品，研細，取3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.2.1 線性關系的考察取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定為9.05 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為362 μg·mL－1的龍膽苦苷對照品母液。精密量取龍膽苦苷對照品母液1 mL、2 mL、3 mL、5 mL，分置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得不同濃度的龍膽苦苷對照品溶液(36.2 μg·mL－1、72.4 μg·mL－1、108.6 μg·mL－1、181 μg·mL－1)。精密吸取各濃度的對照品溶液及對照品母液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，結果見表1。