田口方法在西藏砂生槐種子組培誘導(dǎo)試驗(yàn)中的應(yīng)用

摘要：采用Ｌ９（３４）正交設(shè)計(jì)，用西藏砂生槐（Ｓｏｐｈｒａ ｍｏｏｒｃｒｏｆｔｉａｎａ）種子幼苗為外植體，研究ＮＡＡ、6-ＢＡ和ＩＢＡ不同濃度配比對(duì)組培增殖系數(shù)的影響，采用田口方法對(duì)試驗(yàn)的３個(gè)因素及各水平進(jìn)行Ｓ／Ｎ值分析。結(jié)果表明，用ＭＳ＋２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．４ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ培養(yǎng)基時(shí)，西藏砂生槐種子幼苗接種可獲得最佳的增殖系數(shù)。

關(guān)鍵詞：西藏砂生槐種子；組培；增殖系數(shù)；田口方法

中圖分類號(hào)：Ｓ７９２．２６文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０11）16－3421-02

Application of Taguchi Method in Tissue Culture and Induction of

Sophra moorcroftiana Seed

ＱＵ Ｆｅｎ－ｘｉａ

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｅｚｈｏｕ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｈｅｚｈｏｕ ５４２８００，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｌ９（３４） ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＮＡＡ， ６－ＢＡ ａｎｄ ＩＢＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎs ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｂｕｄ ｏｆ Ｓｏｐｈｒａ ｍｏｏｒｃｒｏｆｔｉａｎａ ｓｅｅｄ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｒａｆｔ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ Ｓ／Ｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｃｃｏｍｐｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｔａｇｕｃｈｉ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｉｆ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｓｏｐｈｒａ ｍｏｏｒｃｒｏｆｔｉａｎａ ｓｅｅｄ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｗｉｔｈ ＭＳ＋２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．４ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｓｏｐｈｒａ ｍｏｏｒｃｒｏｆｔｉａｎａ ｓｅｅｄ； ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ； ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ； Ｔａｇｕｃｈｉ ｍｅｔｈｏｄ

砂生槐（Ｓｏｐｈｒａ ｍｏｏｒｃｒｏｆｔｉａｎａ）又稱“西藏狼牙刺”、“刺柴”，豆科豆屬多年生矮而多枝的灌木，生于干燥的山坡、沙灘，為西藏特有植物［１］。其主根發(fā)達(dá)，具有防風(fēng)固沙作用；嫩枝葉和干葉富含蛋白質(zhì)等營養(yǎng)成分，有較高的飼用和食用價(jià)值［２］；藏醫(yī)學(xué)認(rèn)為其種實(shí)性寒味苦，能消炎解毒，治濕熱黃疸、白喉等疾病；研究表明，砂生槐含有豐富的苦參類生物堿，它具有抗癌、升血、平喘和抗心律不齊等方面的藥用效果，此外還能抑制植物致病細(xì)菌和真菌的生長繁殖，是天然藥物和生物農(nóng)藥的主要原料，具有廣闊的應(yīng)用前景［３］。

長期以來，當(dāng)?shù)厝罕娎闷渲仓赀M(jìn)行牲畜放牧或用作生活燃料，不僅對(duì)當(dāng)?shù)卮嗳醯纳鷳B(tài)環(huán)境造成了極大破壞，而且野生分布數(shù)量急劇減少。對(duì)西藏砂生槐人工種植可以一次種植，多次利用，但用種子和根蘗繁殖苗木生長周期長，且繁殖系數(shù)低，極大地限制了砂生槐規(guī)模化種植和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。與其他無性繁殖相比，組培苗不僅能保持原有品種的優(yōu)良性狀，而且繁殖速度快、繁殖系數(shù)大，還具有提前開花結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)，可進(jìn)行周年工廠化生產(chǎn)，經(jīng)濟(jì)效益高。我國目前對(duì)砂生槐的組織培養(yǎng)技術(shù)研究尚屬空白，為了保護(hù)開發(fā)和利用這一珍貴的植物資源，試驗(yàn)利用野生砂生槐種子進(jìn)行無菌培養(yǎng)，選用不同的植物生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度配比，誘導(dǎo)芽苗增殖培養(yǎng)，以期為砂生槐的工廠化育苗提供依據(jù)。

１材料與方法

１．１試驗(yàn)材料

西藏砂生槐種子于２００３年９月采自西藏自治區(qū)米林縣，自然通風(fēng)晾曬后用普通干藏法貯存，選取飽滿無病蟲害的種子，用自來水沖洗３０ ｍｉｎ后，用體積分?jǐn)?shù)為７５％的酒精浸泡３０ ｓ，再用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為０．２％的高錳酸鉀消毒２０ ｍｉｎ，然后用無菌水沖洗３次，把經(jīng)過以上處理的種子用刀片輕輕劃破種皮，接種在ＭＳ＋５０ ｍｇ／Ｌ活性炭的培養(yǎng)基上，淺層液體培養(yǎng)５０ ｄ。

１．２試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)的因素與水平設(shè)計(jì)見表１，采用Ｌ９（３４）正交設(shè)計(jì)［４］（表２），把無菌萌發(fā)的西藏砂生槐幼苗切去下胚胚軸和根，將莖苗接種在以上９種培養(yǎng)基中，每瓶接２個(gè)芽苗，每個(gè)處理接１０瓶，重復(fù)３次。基本培養(yǎng)基為ＭＳ培養(yǎng)基，蔗糖為３０ ｇ／Ｌ，瓊脂粉為３ ｇ／Ｌ（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司），ｐＨ值為６．０；光照時(shí)間為１６ ｈ／ｄ，光照強(qiáng)度為２ ０００ ｌｘ左右，培養(yǎng)室溫度控制在（２３±２）℃，培養(yǎng)周期為４０ ｄ。

1.3統(tǒng)計(jì)分析

調(diào)查增殖系數(shù)，對(duì)調(diào)查數(shù)據(jù)取其平均值，采用田口方法的靜態(tài)望大特性Ｓ／Ｎ值進(jìn)行試驗(yàn)分析和試驗(yàn)優(yōu)化設(shè)計(jì)。增殖率＝再生芽苗數(shù)／接種芽苗總數(shù)×１００％。

２結(jié)果與分析

對(duì)于望大特性，從試驗(yàn)結(jié)果表２可見，Ｓ／Ｎ值越大，代表此因素在該水平處理效果最佳，極差最大的對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響也最大，可知重要因素排序依次為Ｂ、Ｃ、Ａ，也就是說，６－ＢＡ對(duì)試驗(yàn)結(jié)果也就是西藏砂生槐芽苗增殖影響最大，其次是ＩＢＡ、ＮＡＡ。從Ｓ／Ｎ值趨勢(shì)圖（圖１、圖2、圖３）可以看出，在試驗(yàn)的三因素三水平中，最佳處理組合為Ａ１Ｂ３Ｃ２，即ＭＳ為基本培養(yǎng)基，加入２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．４ ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ為最佳增殖培養(yǎng)基。

３結(jié)論與討論

田口方法目前主要應(yīng)用于機(jī)械、管理等領(lǐng)域［5］，而在組培快繁技術(shù)領(lǐng)域鮮有使用的相關(guān)報(bào)道。而利用種子幼苗作為組培快繁的外植體，國內(nèi)研究較多，如雪蓮、羅麻布、普通狗牙根等［6－8］用種子組織培養(yǎng)，獲得了理想的效果，試驗(yàn)以西藏砂生槐種子為外植體，采用田口方法的試驗(yàn)設(shè)計(jì)并對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了Ｓ／Ｎ值分析，研究了植物生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度對(duì)西藏砂生槐不定芽增殖系數(shù)的影響，分裂素６－ＢＡ對(duì)其影響最大，其次是生長素ＩＢＡ，砂生槐對(duì)ＮＡＡ誘導(dǎo)最不敏感。最佳處理為Ａ１Ｂ３Ｃ２，即最佳的增殖培養(yǎng)基是ＭＳ＋２．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．４ｍｇ／Ｌ ＩＢＡ。

在組培快繁技術(shù)中，從生芽的誘導(dǎo)受到很多因素的限制，誘導(dǎo)過程中還會(huì)發(fā)生褐化及玻璃化等問題，常常會(huì)影響增殖芽苗質(zhì)量。在西藏砂生槐幼苗組培苗的誘導(dǎo)試驗(yàn)中，就碰到玻璃化的問題，引起這個(gè)現(xiàn)象發(fā)生的原因很多，比如６－ＢＡ濃度過高、溫度過高或者光照不足等，對(duì)這些問題的解決，還有待深入細(xì)致地研究。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 中國科學(xué)院青藏高原綜合科學(xué)考察隊(duì)． 西藏植物志（第二卷）［Ｍ］． 北京：科學(xué)出版社，１９８５． ７１７．

［２］ 李玉祥． 西藏砂生槐綜合利用價(jià)值的研究［Ｊ］． 西藏畜牧獸醫(yī)，１９９４（２）：５５－５８．

［3］ 馬興銘． 西藏砂生槐生物堿抑菌及殺蟲活性測(cè)定［Ｊ］． 中國生物防治，２００５，２１（３）：１８６－１８７．

［4］ 李永文，劉新波． 植物組織培養(yǎng)技術(shù)［Ｍ］． 北京：北京大學(xué)出版社，２００７．

［5］ 郁煒，呂迅．基于田口方法的鈮酸鋰基片ＣＭＰ工藝研究［Ｊ］． 輕工機(jī)械，２００９，２７（１）：９５－９７．

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［7］ 劉志華，馬艷紅，曹楓． 羅麻布種子組培再生體系研究［Ｊ］． 種子，２０１０，２９（４）：５－８．

［8］ 姜茜，張琪，鄭麗屏，等．普通狗牙根種子組培技術(shù)優(yōu)化及植株再生［Ｊ］． 北方園藝，２０１０（１０）：１６２－１６６．