淫羊藿提取工藝優化研究

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(1.長春中醫藥大學，吉林 長春 130117；2.中國中醫科學院中藥研究所 北京 100700)

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿EpimediumbreviconumMaxim.的干燥地上部分。具有補腎陽、強筋骨、助陽益精和祛風濕功能。用于陽痿、腰膝痿弱、四肢麻痹及股骨頭壞死等癥。為了優化淫羊藿藥材的提取工藝，筆者采用正交設計試驗法[1]，以該藥材在提取時的出膏率及其中的總黃酮含量為指標，用分光光度法進行含量測定，用綜合簡單分析和方差分析結果，現報道如下。

1 實驗材料

淫羊藿藥材飲片購自長春北藥藥材采購供應站，經鑒定符合《中國藥典》2010年版一部標準；淫羊藿苷標準品(中國藥品生物制品檢定所,批號：10737-200313)；752型紫外光柵分光光度計(上海分析儀器廠)；所用試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 標準曲線的繪制 精確稱取淫羊藿苷標準品0.004 0 g置于25 mL容量瓶中,用甲醇溶解稀釋至刻度，分別從中吸取0.3、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL置于25 mL容量瓶中,定容至刻度，用752型紫外光柵分光光度計在270 nm處,以甲醇為空白對照分別測其吸光值，見表1。以淫羊藿苷濃度(C)對吸光度(A)進行線性回歸。

回歸方程為:C=0.027 9A-0.001 1(r=0.999 7)

表1 淫羊藿苷標準曲線

2.2 穩定性考察 稱取淫羊藿適量加入70%乙醇10倍回流1 h，采用棉花過濾，濾液回收乙醇。放置過夜，過濾。再用300 mL乙酸乙酯分4次萃取,乙酸乙酯層合并，并回收之。最后用甲醇溶解所得稠膏轉溶于25 mL容量瓶中，稀釋至刻度，從中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度。再從中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度。用752型紫外光柵分光光度計在270 nm處，以甲醇為空白對照，每隔20 min測1次其吸光值，見表2。

表2 穩定性實驗結果

數據結果表明:在2 h內總黃酮含量穩定，不影響測定結果。

2.3 加樣回收實驗 先取已知總黃酮含量的樣品5分，再分別按表3劑量加入淫羊藿苷標準品。依照標準曲線制備項下方法測定并計算樣品中總黃酮含量，結果見表3。

表3 回收實驗測定結果

2.4 工藝條件優化

2.4.1 水提工藝條件考查[2]

2.4.1.1 實驗方法 取干燥藥材9分,每分20 g。分別加水浸泡所需時間，之后再加熱煎煮所需時間，得煎煮液，濾液濃縮至50 mL左右。放置過夜，過濾。用約300 mL乙酸乙酯分4次萃取，合并乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯。再用甲醇溶解所得稠膏轉溶于25 mL容量瓶中,稀釋至刻度，從中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度。再從中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度。用752型紫外光柵分光光度計在270 nm處,以甲醇為空白對照，測其吸光值。根據回歸方程計算有效成分的含量，見表4，表5。

表4 L9(34)正交試驗安排

表5 方差分析

2.4.1.2 實驗結果 4個因素的影響程度次序為B>C>A>D，即浸泡時間影響最大，煎煮時間其次，加水倍量次之，煎煮次數影響最小。最佳工藝A3B2C3D2,即加8倍水、浸泡藥材1.0 h、煎煮2次、每次2.0 h。

2.4.2 醇提工藝條件考查

2.4.2.1 實驗方法取干燥藥材9分，分別加入各濃度乙醇回流提取，得提取液,濾液回收乙醇。靜置過夜，抽濾。再用約300 mL乙酸乙酯分4次萃取，合并乙酸乙酯層，之后回收乙酸乙酯。再用甲醇溶解所得稠膏并轉溶于25 mL容量瓶中，稀釋至刻度，從中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。再從中吸取1 mL置于25 mL容量瓶中,以甲醇定容至刻度。用752型紫外光柵分光光度計在270 nm處,以甲醇為空白對照，測其吸光值。根據回歸方程計算有效成分的含量，見表6，表7。

表6 正交試驗安排

表7 方差分析

2.4.2.2 實驗結果 醇提4個因素的影響程度次序為D>B>A>C，即回流次數影響最大,加醇量其次，乙醇濃度再次之，回流時間影響最小。最佳工藝A3B2C1D3,即加10倍量70%的乙醇回流提取3次，每次1 h。

3 討論

組方中的淫羊藿含的淫羊藿苷可溶于水、甲醇、乙醇等，故可通常采用水提醇沉法、乙醇回流法、滲漉法等方法提取。根據文獻報道[3-4]，乙醇回流法是較佳的提取方法。

由試驗結果簡單分析法和方差分析結果可知，醇提較水提有效成分的含量有大幅度的提高，水提最高含量為2.133%，而醇提最高含量為3.130%，且普遍在2.081～3.130之間。所以，考慮到更為有效的利用資源,可采用乙醇提取。其中最佳工藝條件為10倍量70%的乙醇回流提取3次，每次1 h。

[1]張春華,嚴云良.醫藥數理統計[M].北京:科學技術出版社,2001:270.

[2]朱春林,高素琴.淫羊藿的提取工藝優選[J].時珍國醫國藥,2001,12(8):687.

[3]申慶亮,丁濤.正交設計法研究淫羊藿提取工藝條件[J].中國實驗方劑學雜志,2001,7(5):51.

[4]王成軍,鄧曉娟.淫羊藿總黃酮提取工藝研究[J].基層中藥雜志,2002,16(5):331.