HPLC法測定葛蒡合劑中葛根素的含量

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(1.吉林大學第三醫院，吉林 長春 130021；2.吉林省人民醫院，吉林 長春 130021)

葛蒡合劑是由葛根、牛蒡子、荊芥、薄荷等5味中藥組成的復方制劑[1]。具有辛涼透表的功效，用于風熱感冒，頭痛發熱，咳嗽咽痛及麻疹初期或出疹不透等癥。本文選擇葛根中葛根素含量作為指標成分，建立了葛蒡合劑中葛根素的HPLC測定法，為該藥的質量控制提供了定量評價方法，以便更好地控制產品的質量，保證安全及療效。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀；紫外檢測器，CLASS-VP工作站，色譜柱:Agilent C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)。芍藥苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號0736-9913,供含量測定用。葛蒡合劑為通化鴻茂有限公司提供樣品，批號：20090105、20090106、20090107，甲醇為優級純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 采用Agilent C18，4.6 mm×150 mm，5 μm色譜柱，以甲醇-水(25∶75)為流動相；檢測波長為250 nm。理論板數按葛根素峰計算應不低于3 000。

2.2 測定波長的選擇 取葛根素對照品的甲醇溶液，經UV-2201紫外分光光度計200 nm～320 nm范圍內掃描，葛根素在250 nm波長處有最大吸收，故選擇250 nm為本實驗的測定波長。

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取葛根素對照品適量，加甲醇溶解,并配制成每1 mL含0.07 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備 精密量取本品1.5 mL，置50 mL量瓶中，加60%甲醇適量,超聲處理(功率250 W,頻率33 kHz)20 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，取上清液，濾過，取續濾液，即得。

2.5 陰性對照液制備及干擾試驗 按處方取去除葛根藥材的其它藥材，按樣品工藝同法制備，制得陰性對照樣品，再按供試品溶液的制備方法操作，制成陰性對照溶液。分別精密吸取對照品溶液，供試品溶液，陰性對照溶液各10 μL，按上述色譜條件進樣分析，繪制色譜圖，測定結果表明：供試品色譜中，與對照品色譜相應位置上，具有相同保留時間的色譜峰，而陰性對照色譜中無干擾。

2.6 線性關系 精密稱取葛根素對照品溶液4、8、12、16、20 μL，分別注入液相色譜儀，按前述色譜條件測定，以進樣量(μg)為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標繪制標準曲線,求出回歸方程為Y=220 696 1.313X+402 97.677，相關系數r=0.999 7,線性范圍為進樣量在0.28 μg～1.40 μg范圍內，與峰面積呈良好的線性關系。

2.7 精密度試驗 取同一供試品溶液，依法連續進樣5次，每次10 μL,在上述色譜條件下，測定色譜峰面積，測定結果峰面積平均值為160 928 4.125，RSD=0.54%，表明精密度良好。

2.8 穩定性試驗 取同一供試品溶液10 μL，按上述條件進行分析,測定時間為0、2、4、6、8 h，測定色譜峰面積，結果表明供試品溶液的8 h內穩定，RSD=0.76%。

2.9 重復性試驗 取同一批次樣品5份,按2.4項下的方法制備供試品溶液。按前述色譜條件進行分析，測定結果表明樣品中葛根素含量(mg/10 mL)分別為25.401 5、25.103 6、25.601 7、25.006 8、24.986 1，平均25.219 9 mg/10 mL，RSD為1.07%。結果表明重復性好。

2.10 加樣回收率試驗 精密量取已知葛根素含量的樣品(批號：20090105,每10 mL葛根素含量為25.219 9 mg)1.0 mL，5份，分別精密加入葛根素對照品適量，按供試品溶液制備方法操作，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

表1結果表明方法的回收率較好。

2.11 樣品的含量測定 按上述方法，制備供試品溶液，測定3批葛蒡合劑中葛根素的含量，結果見表2。

表2 3批樣品中葛根素含量測定結果

3 結論

在實驗過程中,曾選用甲醇-水-冰醋酸(25∶64∶1)、甲醇-0.5%醋酸(25∶75)等多種流動相，因其色譜峰分離效果不好，而未被應用。經實驗證明,確定甲醇-水(25∶75)為流動相，其色譜峰得到較好分離，而被采用[2-3]。

本文采用高效液相色譜法，測定了葛蒡合劑中葛根素的含量，其方法簡便、準確，靈敏，回收率較好，可為該制劑的質量控制提供一個有效內在質量控制指標。

[1]國家藥典委員會.衛生部藥品標準:第5冊[S].北京:人民衛生出版社,2000:173.

[2]楊翠微,張俊瑋.HPLC測定參蘇丸中葛根素的含量[J].湖南中醫藥導報,2000,6(10):36.

[3]黃亞非,張永明,何翱,等.采用高效液相色譜法測定心脈通口服液中葛根素含量[J].中國中藥雜志,2001,26(11):760.