高效液相色譜技術在千柏鼻炎片中大黃酚含量測定中的應用

周長征

(山東中醫(yī)藥大學藥學院，濟南250355)

千柏鼻炎片是由千里光、卷柏、決明子等7味中藥制備的復方制劑，收載于2005版藥典一部，但質(zhì)量標準中沒有該藥含量測定項目，2010版藥典中亦沒有其含量測定結果。2010年9～11月，我們采用高效液相色譜技術測定了其主要成分決明子中大黃酚的含量，現(xiàn)報告如下。

材料:大黃酚對照品購自中國藥品生物制品檢定所;千柏鼻炎片由濟南康眾醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司提供(批號:20090907);甲醇為色譜純(天津市由科密歐化學試劑開發(fā)公司);水為雙蒸水;其它試劑均為分析純。P680高效液相色譜儀，UVD170U檢測器，DIODE色譜數(shù)據(jù)工作站(美國戴安公司)，DT-230A型柱溫箱;SP8810高效液相色譜儀，SP200紫外檢測器，N2000色譜數(shù)據(jù)工作站(浙江大學智能信息工程研究所)。TU-1800SPC紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。

實驗條件:①色譜條件:色譜柱為phenomenex C18(4.6×250 mm，0.5 μm)，流動相為甲醇 -0.1%磷酸(85∶15)，柱溫35℃，流速1 ml/min，檢測波長254 nm;理論板數(shù)以大黃酚計不應低于2 500。②溶液制備:分別采用甲醇稀釋法制備對照品溶液，甲醇回流提取、三氯甲烷萃取法制備供試品(含決明子)及陰性樣品溶液(不含決明子)。

測定項目、方法及結果:①專屬性:按上述色譜條件，取上述3種溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄譜圖。結果表明，供試品色譜圖中與對照品色譜峰相應的位置上有相同的色譜峰，主峰與其他色譜峰之間分離良好;在陰性溶液色譜圖中，與大黃酚保留時間相同的位置上無色譜峰，表明處方中其他組分對大黃酚含量測定無干擾;大黃酚主峰理論塔板數(shù)＞2 500，與其他峰之間分離度均＞1.5，滿足含量測定要求。②線性關系:精密稱取大黃酚對照品12.68 mg，置50 ml量瓶中，用無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)溶解并定容至刻度，作為線性測定儲備液，分別精密吸取儲備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 ml置 25 ml量瓶中，用無水乙醇-乙酸乙酯(2∶1)稀釋至刻度，搖勻，分別取20μl注入高效液相色譜儀，測定峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。其回歸方程為:Y=74.979X-0.078 7，r=0.999 9。結果表明大黃酚在 0.12 ～4.04 μg 范圍內(nèi)線性關系良好。在0.101～0.812μg范圍內(nèi)線性關系良好。③精密度:a重復性:取樣品5份，每份約3 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法和色譜條件測定大黃酚的含量。結果顯示重復性良好。b中間精密度:取樣品約3 g精密稱定，按上述試驗確定的供試品溶液制備方法和色譜條件，于同一實驗室，不同日期、不同分析人員行大黃酚含量測定。結果顯示中間精密度良好。④穩(wěn)定性試驗:取供試品溶液制備方法項下提取樣品溶液，室溫下放置，于 0、2、4、6、8、10 h分別進樣，測定其峰面積，平均峰面積為44.563;RSD%=0.16%。結果表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。⑤檢測范圍:取1.5、3、4 g樣品精密稱定，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測定大黃酚含量。結果表明，在標準取樣量的±50%范圍內(nèi)，測定樣品含量結果基本穩(wěn)定。⑥加樣回收率試驗:取已知大黃酚含量(0.210 mg/g)的千柏鼻炎片適量，精密稱定，精密加入大黃酚對照品適量，按供試品溶液的制備方法及上述色譜條件進行測定，計算回收率。結果表明回收率良好。

討論:高效液相色譜技術以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。目前其已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。本研究采用高效液相色譜技術測定千柏鼻炎大黃酚含量，結果表明其專屬性、線性關系、精密度、穩(wěn)定性、檢測范圍、回收率均較好，證實高效液相色譜技術可用于千柏鼻炎片中大黃酚含量的測定。