食管鱗癌 Bmi-1蛋白表達與化療療效的關系

魏 玲，李蘇宜，孫三元，袁保蘭，孫 麗

(1徐州市中心醫院，江蘇徐州 221009;2東南大學附屬中大醫院)

Bmi-1基因廣泛表達于多種類型干細胞，參與造血干細胞和神經干細胞的自我更新，高表達 Bmi-1蛋白細胞被認為是腫瘤中存在的腫瘤干細胞[1]。本研究通過免疫組化方法檢測 Bmi-1蛋白在食管鱗癌組織中的表達，并探討其與食管鱗癌化療療效的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集徐州市中心醫院 2002～2008年保存的食管鱗癌石蠟標本 30例，病例均經病理學確診，術后均出現復發轉移。給予鉑類藥物聯合方案化療，化療后完全緩解 +部分緩解 11例(CR+PR組)，穩定 9例(SD組)，進展 10例(PD組)。

1.2 方法 每個蠟塊取 4μm厚連續切片做免疫組化染色。先將切片置于二甲苯中脫蠟，乙醇梯度水化處理，檸檬酸緩沖液抗原煮沸修復，滴加鼠抗人Bmi-1單克隆抗體(1∶50，英國 Abcam公司)，37℃孵育1 h，滴加二步法免疫組化檢測試劑山羊抗小鼠IgG抗體-HRP多聚體(北京中杉公司)，DAB顯色，蘇木精復染，鹽酸乙醇固定，封片、觀察。用 PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結果判斷 Bmi-1蛋白陽性表達主要表現為細胞核內呈現棕黃色或者棕褐色顆粒。高倍鏡下隨機取 4個不同的視野，計數細胞總數及核陽性細胞數，按陽性細胞所占的百分比計分。陽性細胞率≤10%為 1分，＞10% ～≤50%為 2分，＞50% ～≤75%為 3分，＞75%為 4分。同時，根據染色的強弱程度計分。陰性染色 1分，弱染色 2分，中等強度染色 3分，強染色 4分。根據陽性細胞率和染色強弱計分的乘積判斷結果:≤4為(-);＞4～≤8為(+);＞8～≤12為(++);＞12～≤16為(+++)。統計分析時(-)和(+)合計為陰性表達，(++)和(+++)合計為陽性表達。以上結果均至少由兩位病理科醫生以雙盲法觀察確定。

1.4 統計學方法 SPSS13.0統計軟件對實驗數據用 R×C表Fisher's Exact Test進行分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Bmi-1蛋白在食管鱗癌組織中的表達 Bmi-1蛋白陽性表達主要為細胞核內出現棕黃色顆粒。Bmi-1蛋白在食管鱗癌標本中的陽性表達率為23.3%(7/30)。

2.2 Bmi-1蛋白在食管鱗癌組織中的表達與鉑類藥物聯合化療療效的關系 Bmi-1蛋白在 PR+CR組陽性表達率為 36.36%(4/11)，在 SD組陽性表達率為 11.11%(1/9)，在PD組陽性表達率為20.00%(2/10)。各組 Bmi-1蛋白陽性表達率比較差異無統計學意義(P＞0.05)，食管鱗癌 Bmi-1蛋白表達與鉑類藥物聯合化療療效無關。

3 討論

Bmi-1基因是一種致癌基因，屬于多巰基因家族成員，首次被提出是在 1991年轉基因鼠的淋巴瘤細胞傳代中，作為一種原癌基因與另一種癌基因 cmyc協同作用引起細胞轉化和腫瘤形成[2]。高表達Bmi-1的細胞被認為是腫瘤中存在的腫瘤干細胞。最近，Umar[3]研究認為，腸干細胞存在于 Bmi-1陽性的腸隱窩。腫瘤干細胞是腫瘤細胞群體中具有部分干細胞特性的細胞亞群，其增殖能力明顯強于同一腫瘤組織中的其他癌細胞，在腫瘤的發生、發展和維持中起十分重要的作用。腫瘤干細胞的概念第 1次被提出是在急性粒細胞白血病的研究中，認為腫瘤干細胞是來自惡性白血病干細胞的異常造血組織。腫瘤中存在 ＜1%的腫瘤干細胞，它們通過分裂和增殖產生具有自身表型的子細胞及其分化細胞。腫瘤細胞能夠分離出不同亞群并可顯示某一亞群具有高度的克隆能力則證實了這一假說。研究表明，腫瘤干細胞與腫瘤出現轉移、抗藥性的產生以及治療后的復發轉移有密切關系。Dirks[4]已經報道，Bmi-1低表達的腫瘤細胞有較低的侵襲性，因為它有較少的干細胞。目前新的研究證實，惡性腫瘤中存在腫瘤干細胞，腫瘤干細胞抵抗治療，導致治療失敗，使腫瘤復發[5]。Bmi-1在肺癌、胃癌、食管癌、鼻咽癌等多種腫瘤中呈高表達，并且 Bmi-1的表達在轉錄水平和翻譯水平的上調與腫瘤的不良預后密切相關。覃麗在鼻咽癌的實驗中通過 Hoechst33258染色和流式細胞儀檢測顯示抑制內源性 Bmi-1的表達能增加 5-Fu所誘導的凋亡效應，Bmi-1干擾能增加鼻咽癌細胞對化療藥 5-Fu的敏感性;干擾 Bmi-1能顯著抑制 AKT的活性，上調 Bax的表達并下調Bcl-2的表達;Bmi-1干擾能通過 P13K/AKT途徑增加 5-Fu誘導的鼻咽癌細胞的凋亡。在急性髓細胞性白血病研究中發現，Bmi-1基因的高表達不利于AML患者獲得良好的治療效果，提示 Bmi-1基因表達水平可以作為部分腫瘤患者療效預測指標之一[6，7]。對肺癌患者的研究也證實，大量表達的Bmi-1基因產物不利于肺癌患者從化療中獲益[8]。Qin等[9]在鼻咽癌的研究中發現，低表達 Bmi-1基因的腫瘤細胞對化療藥物 5-Fu敏感，該效應與促進5-Fu誘導的細胞凋亡有關。上述研究提示Bmi-1干擾聯合化療藥物能提高化療敏感性，也就是說，高表達 Bmi-1的腫瘤細胞易產生化療耐藥。

本研究結果顯示，Bmi-1蛋白表達與以鉑類藥物為基礎的聯合化療療效無相關性，Bmi-1蛋白不能成為預測化療敏感性的指標，與以上有關研究結果不一致。由于本次實驗樣本例數少，Bmi-1表達與食管鱗癌化療敏感性的關系仍需進一步研究。

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[3]Umar S.Intestinal stem cells[J].Curr Gastroenterol Rep，2010，12(5):340-348.

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