復方芪竭膏促進大鼠創面愈合的機理研究*

何德才,艾儒棣

(1.川北醫學院附屬醫院肛腸科,四川南充 637000;2.成都中醫藥大學中醫外科教研室,四川成都 610075)

復方芪竭膏是按成都中醫藥大學艾儒棣教授的經驗方制備而成,經數十年的臨床應用,均顯示出良好的消炎、止痛、促進瘡瘍愈合的功效,為進一步探討復方芪竭膏的促愈效應及其可能的作用機理。我們進行了動物實驗觀察,現報道如下。

1 資料與方法

1.1 藥物來源與制劑加工:復方芪竭膏:由中藥黃芪 50g、血竭 50g、紫草 10g、當歸 20g、白芷 20g、冰片10g、麻油 500g按傳統工藝制備成油膏制劑。京萬紅軟膏(JWH)由天津達仁堂京萬紅藥業有限公司生產,批號:Z12020440。

1.2 受試藥物復方芪竭膏(CQJC)制備:將方中血竭、冰片取出研成細粉,過 100目篩,備用。將方中余藥黃芪、血竭、紫草、當歸、白芷、甘草等浸入麻油中浸泡 72小時,將油及藥入鐵鍋內,文火使藥料炸至表面呈深褐色,中部焦黃為度,濾去藥渣,待溫度降至適宜時,將冰片細粉徐徐攪拌入藥油中,再將一定比例醫用凡士林基質加入其中,文火徐徐收膏備用。

1.3 實驗動物與造模方法[1,2]:選用 SD大鼠 60只,雌雄不拘。體重(220±10)g。于大鼠后背部脊柱旁開 1cm處打孔造成直徑 1.8cm的圓形,全層皮膚切除,開放創面,深達肌肉,止血。

1.4 實驗分組與給藥方法:按隨機分組法,分為模型組(A組)、陽性藥物對照組京萬紅(B組)、治療組復方芪竭膏組(C組),每組各 6只大鼠。A組大鼠創面外敷凡士林 0.1g,B組大鼠創面外敷京萬紅膏 0.1g,C組大鼠創面外敷復方芪竭膏 0.1g;均消毒紗布包扎固定。各組大鼠每日換藥 1次。

1.5 觀察項目與檢測方法:第 3、7、10、14天,用滌綸投影膜描計創面大小,用圖像分析軟件 MIAS2000予以分析,計算創面愈合率;分別于第 3、7、14天隨機選取各組 6只大鼠采用過量麻醉處死,剪取創緣交界處肉芽組織,用 S-P法測定溶菌酶(Lysozyme)的表達,用 Tunel-AP法進行原位細胞凋亡檢測。

1.6 統計學方法:計量資料以 x-表示;多組間樣本均數比較用方差分析和兩兩比較 q檢驗。實驗數據用 SPSSl6.0統計分析軟件處理。

2 結 果

2.1 創面愈合率比較結果顯示:與模型組相比,京萬紅組、芪竭膏組第 7、10、14天創面愈合率均優于對比組,具有統計學意義(p＜0.05),其中芪竭膏組有顯著性差異(p＜0.01);與京萬紅組相比,芪竭膏組第 7、10天創面愈合率優于對比組,具有統計學意義(p＜0.05)。提示京萬紅組、芪竭膏組均有促進創面愈合的作用,尤其在皮膚創面愈合的中、后期,芪竭膏組有明顯促進創面愈合的作用,見表 1。

表1 各組愈合率的比較(%,x-±s,n=6)

2.2 用 S-P法測定溶菌酶(Lysozyme)的表達:結果顯示:復方芪竭膏組與京萬紅組大鼠創面溶菌酶含量在術后第 3、7、14天均較模型組大鼠多(p＜0.01)。術后第 3、7天復方芪竭組與模型組比較 p＜0.01;京萬紅組與模型組比較 p＜0.01。術后第 7天,復方芪竭組大鼠創面溶菌酶含量達到峰值,較模型組多(p＜0.01);此時京萬紅組大鼠創面溶菌酶含量少于復方芪竭組(p＜0.05)。術后第 14天,復方芪竭膏組大鼠創面溶菌酶含量較術后第 7天有減少趨勢,但仍較模型組大鼠多(p＜0.01);復方芪竭膏組與模型組比較,p＜0.01;而此時京萬紅組大鼠創面溶菌酶含量少于復方芪竭組(p＜0.05),見表 2。

表2 各組溶菌酶含量(x-±s)變化(IOD×103 n=6)

2.3 用 Tunel-AP法進行原位細胞凋亡檢測:結果顯示:復方芪竭膏組與京萬紅組大鼠創面凋亡細胞凋亡指數在術后第 3、7天均較模型組大鼠多(p＜0.01)。術后第 3、7天復方芪竭組與模型組比較 p＜0.01;京萬紅組與模型組比較 p＜0.01。術后第 7天,復方芪竭組大鼠創面凋亡細胞凋亡指數達到峰值,較模型組多(p＜0.01);此時京萬紅組大鼠創面凋亡細胞凋亡指數明顯少于復方芪竭組(p＜0.01)。術后第 10天,復方芪竭膏組大鼠創面凋亡細胞凋亡指數較術后第 7天有明顯減少,與模型組比較無統計學意義(p﹥ 0.1);與京萬紅組比較有統計學意義(p＜0.05);術后第 14天,復方芪竭膏組與模型組比較,p＜0.01;而此時京萬紅組創面凋亡細胞凋亡指數較術后第 10天增多(p＜0.01),見表3。

表3 創面原位凋亡細胞凋亡指數(x-±s)(AI%)

3 討 論

創傷修復始終是外科領域中的研究熱點之一。目前對其研究已深入到細胞、分子與基因水平[1]中醫促進創面愈合的機理主要是針對創面愈合的主要影響因素發揮其多靶點、多環節、多層次的綜合調控作用[2]。中醫認為,創傷后機體氣血失調、營衛失和,氣血凝滯,經絡阻塞,臟腑功能失調:故活血化瘀、行氣通絡是愈創的關鍵。

復方芪竭膏是成都中醫藥大學艾儒棣教授根據明代陳實功的《外科正宗》生肌玉紅膏去輕粉,加黃芪化裁而成的經驗方,經數十年的臨床應用,均顯示出良好的消炎、止痛、促進瘡瘍愈合的功效。主要由中藥黃芪、血竭、紫草、當歸、白芷、冰片、麻油組成。方中黃芪具有補氣升陽、益衛固表、托毒生肌的功效。血竭始載于《唐本草》,其性味甘溫、咸、平,具有活血化瘀、祛腐生肌、收斂止血、消腫止通的功效,古代主要將它用于治療跌打損傷、金瘡等癥,是中醫用于生肌的最常見藥物。二藥共為君藥。紫草味苦寒,涼血活血,清熱解毒,當歸活血祛瘀,能改善局部組織血液循環,白芷入藥始見于《本草綱目》,載曰“排膿生肌止痛”。潰膿止痛而達生肌之功效。三藥共為臣藥。冰片外用具有清熱止痛、止癢生肌、燥濕收膿、促進藥物吸收作用為佐藥。麻油具有很好的輔助療效,能酸化傷口,利于傷口肉芽組織的生長,為使藥。全方共奏補氣固表、清熱解毒、活血化瘀、升肌收口的功效。

溶菌酶通常存在于吞噬細胞胞漿的溶酶體中,是吞噬細胞吞噬并消化細菌和異物最主要的活性酶。它的含量不僅反應吞噬細胞的活性,也能從一定程度反應炎癥反應程度。本實驗采用 S-P免疫組化染色方法顯示的溶菌酶分布面積可以相對表示組織中巨噬細胞的分布范圍,即在一定程度上表示活躍的吞噬細胞的數量,而陽性細胞胞漿 IOD均值則可以從一定程度反應陽性細胞胞漿中溶菌酶的相對平均含量。而溶菌酶本身就有很好的殺菌效果,創面溶菌酶菌能力強。本實驗結果顯示:無論從質到量,復方芪竭膏組優于其他各組,同時溶菌酶到達峰值時間較其它組提前,持續時間也較長,提高創面吞噬細胞溶菌酶含量意味著增強巨噬細胞活性及功能,而巨噬細胞的功能的增強,清理“廢墟”的作用必然增強。實驗中外用中藥作用的創傷滲出液中含有大量形態和功能活躍的巨噬細胞,可能是外用中藥“偎膿長肉”的理論基礎。

細胞凋亡是指外界因素和內部因素相互作用后,通過一系列分子信號的傳導,引發特異基因表達,而最終導致的細胞主動死亡。細胞凋亡與創面修復有密切關系,它參與調控創面愈合過程中的多個環節而影響預后。通過細胞凋亡機制可使炎癥過程中凋亡細胞被炎癥細胞和其它細胞有效清除,利于創面的愈合和減輕愈合組織中瘢痕的形成。本實驗采用 TUNEL法檢測創面肉芽組織中細胞凋亡情況,統計結果顯示:在換藥的第 3、7d使用復方芪竭膏時,創面凋亡細胞明顯增加,此后逐漸復至正常水平。提示復方芪竭膏具有明顯促進局部組織細胞亡的作用。復方芪竭膏誘導細胞的主動凋亡,特別是誘導位于創面壞死組織與正常組織之間過渡區域的“垂死細胞”的凋亡,利于促進壞死組織的脫落,有利于創傷早期,創面的清創作用。[3]

本實驗說明外用中藥復方芪竭膏能促進皮膚創面愈合,其可能機制是復方芪竭膏能提高創面吞噬細胞溶菌酶含量、誘導細胞的主動凋亡有利于創傷早期創面的清創作用。其促愈的分子機制有待更深入研究。

[1] 付小兵,程 飚,盛志勇.生長因子應用于臨床創傷修復:十年的主要進展與展望[J].中國修復重建外科雜志,2004,18(6):508

[2] 邢 捷,闕華發,唐漢鈞.中醫藥促進皮膚潰瘍創面肉芽組織生長的實驗研究近況[J].中西醫結合學報,2008,6(10):1080

[3] 袁 亮,李國棟.中醫祛腐生肌法祛腐作用機理的實驗研究[J].成都中醫藥大學學報,2007,30(2):45-47