硬脂酸透明法對免疫組化制片的影響與對策

顧文賢

(南京醫科大學附屬常州第二人民醫院病理科,江蘇常州,213003)

目前,在常規石蠟切片工作中,普遍采用二甲苯作為透明劑。但二甲苯屬有毒物質,其毒性主要是對中樞神經和植物神經的麻醉及粘膜的刺激作用[1]。使用硬脂酸做透明劑,無毒無味,不污染工作環境。國內有報道用其來做包埋劑[2]。硬脂酸對組織有軟化作用,對質地較硬、較韌的組織更容易切片,不會出現二甲苯所致的組織收縮,變脆情況[3]。有不遜色于二甲苯的組織處理效果[4]。但是,作者在應用硬脂酸透明的工作中發現使用硬脂酸較二甲苯容易脫片,尤其在免疫組化工作中,雖然不影響免疫組化的結果[5],但有較高的掉片率,給免疫組化制片帶來了一定的困難。針對這一問題,作者進行了技術實驗。其結果如下。

1 材料與方法

本實驗標本均為本科免疫組化蠟塊。包括胃癌,腸癌,甲狀腺組織,子宮內膜癌,乳腺癌,前列腺等等。實驗分組:對照組,質量控制前免疫組化制片,35例,427張切片;實驗組,質量控制后免疫組化制片,37例,324張切片。

對照組:常規組織固定取材后脫水,硬脂酸石蠟混合液3:2 500 mL透明8 h,免疫組化石蠟切片3μm,45℃水溫裱片,70℃烤片,烤片60 min。二甲苯脫蠟,梯度酒精清洗,入蒸餾水,入PBS液緩沖液。視一抗要求抗原修復,煮沸15 min,自然冷卻。一抗試劑共有74種。冰箱4℃過夜。采用Envision兩步法免疫組化標記。蘇木精淡染細胞核,常規脫水透明封固。實驗組 與對照組相比,更換了新的浸蠟的純石蠟1和2兩缸。

結果:對照組質量控制前的免疫組化切片掉片嚴重。切片完整率常規法為88.33%,抗原修復法為72.33%。實驗組,常規法為99.2%,抗原修復法為92.12%。免疫組化切片完整率在浸蠟石蠟質量控制前后有明顯差異(P<0.05)。

2 討 論

作者觀察發現,免疫組化標記的切片完整率與硬脂酸透明后的浸蠟石蠟質量(濃度和純度)有密切相關性。即蠟塊中硬脂酸含量越高組織脫片率也越大。硬脂酸在硬脂酸透明蠟液中的含量呈梯度遞減狀況,與脫水透明標本數量及應用次數有關。同樣在浸蠟石蠟缸1中隨著浸蠟標本數量和應用次數增加,此缸中硬脂酸的含量呈梯度遞增狀況。在浸蠟石蠟缸2中,硬脂酸含量也呈梯度遞增狀況。硬脂酸粘附力差,如果最后一缸浸蠟蠟液中硬脂酸含量過高,極易造成制片過程中的脫片現象。在免疫組化標記制片過程中,這是硬脂酸透明最顯著的缺陷。所以有人提議在用硬脂酸透明時,采用低濃度硬脂酸[6],可使脫片率明顯下降。但濃度過低會導致透明不徹底,切片困難[7]。

作者采用硬脂酸石蠟混合液透明時,硬脂酸:石蠟為3:2的濃度,針對高濃度的硬脂酸導致脫片問題,采取了保證浸蠟的石蠟缸1和2的石蠟純度方法,從按標本量定期更換到按質量更換,切片完整率得到顯著的提高,具有明顯的使用效益。常規染色鮮艷,免疫組化切片標記效果好背景清晰,陽性表達好,染色鮮艷。并且硬脂酸透明對抗原的表達無特別影響[8],這與二甲苯處理的組織是一致的。

[1] 劉鏡愉.現代職業病診療手冊[M].北京:北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社,1997:142.

[2] 王伯云.病理學技術[M].北京:人民衛生出版社,2000:78.

[3] 龔志錦.病理組織制片和染色技術[M].上海:上海科學技術出版社,1994:18.

[4] 密方元,楊洪才.硬脂酸取代二甲苯制片經驗介紹[J].實用癌癥雜志,1996,11(3):209.

[5] 胡小安,盧 靜,張 潤.改良硬脂酸石蠟切片的免疫組化染色效果觀察[J].診斷病理學雜志,2004,12:439.

[6] 古 偉,張國賓.硬脂酸替代二甲苯后組織脫片的預防[J].診斷病理學雜志,1995,2:240.

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