六神栓對小鼠白念珠菌陰道炎治療作用的實驗研究

邢艷芳,將紅心,周曉霞,廖建春,朱網(wǎng)娣,喬 明,李 蓉,龐樹華,蘇佩清

(1.揚州大學臨床醫(yī)學院,江蘇揚州,225001;2.揚州市中醫(yī)院,江蘇揚州,225002)

陰道念珠菌病(VVC),是由白念珠菌引起的一種條件性黏膜感染性疾病,是婦科常見病。患者中復發(fā)率5%～10%。NwokoLo等[1]報道,估計有75%的婦女在其一生中經(jīng)歷過至少1次念珠菌陰道炎發(fā)作。其病原菌以白念珠菌(Candida albicans)居多(90.4%)[2],但也可能是其它菌種,如:熱帶念珠菌(C.tropicalis)、光滑念珠菌[C.(tarulopsis)glabr-ata]、克柔念珠菌(C.krusei)、近平滑念珠菌(C.parapsiLosis)、假熱帶念珠菌(C.pseudotropicalis)等。一般來說,白念珠菌及熱帶念珠菌致病力較強。近幾年來,隨著抗生素及皮質(zhì)類固醇藥物的普遍應用,其發(fā)病率在世界各地呈明顯上升趨勢,嚴重影響婦女的工作及性生活,給婦女造成精神上的痛苦。六神栓是在傳統(tǒng)六神丸(雷氏六神丸)原方配比的前提下,進行劑型改革,自制的陰道栓,臨床報道可用于霉菌性陰道炎的治療[3]。本實驗對其進行了動物在體的藥效學研究,結(jié)果表明六神栓對小鼠白念珠菌性陰道炎有明顯的治療作用。

1 材料與方法

1.1 藥品

陰道用鴨嘴型六神栓,自制;保婦康栓,1.74 g/枚,由海南碧凱藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號070131。

1.2 白色念珠菌

白念珠菌臨床分離菌株(科瑪嘉實驗鑒定),由蘇北人民醫(yī)院檢驗科提供。

1.3 動物

清潔級 ICR小鼠 6～8周齡,雌性,體重 22～25 g:均購自揚州大學醫(yī)學院動物實驗中心。室溫,普通級顆粒飼料喂養(yǎng),分籠飼養(yǎng),實驗時以隨機數(shù)字排列表法分組。

1.4 方法

六神栓的制備:取明膠加適量純化水,使浸潤溶脹,放入適溫的水浴中加熱攪拌蒸去多余的水分,再加甘油攪拌均勻,另準確稱取六神藥粉適量,加適量甘油攪拌使混合均勻,合并入基質(zhì)中,混勻后置恒溫箱中,恒溫脫泡2 h,取出后灌注于事先涂有液狀石蠟的陰道栓模具中[4],待凝固好,脫模,包裝,即得 。

實驗造模及給藥:首先建立小鼠白念珠菌陰道炎模型,再分組給藥。清潔級6周齡雌性ICR小鼠 45只,于接種前6d開始隔日皮下注射2 mg/mL苯甲酸雌二醇油劑0.1 mL,使小鼠處于假發(fā)情狀態(tài),直至實驗結(jié)束為止[5]。在接種日,將密度為2.5×106cfu/mL的菌懸液20 μ L(即白念珠菌孢子接種量為5×104cfu),灌注入所有小鼠陰道內(nèi),于接種后第四天作陰道圖片,結(jié)果白色念珠菌鏡檢為陽性,證明造模成功。將上述小鼠隨機分為5組,即模型組,低劑量六神栓組(11.3 mg/只),中劑量六神栓組(22.5 mg/只)高劑量六神栓組(45 mg/只),保婦康栓組(8.8 mg/只)。模型組每天陰道灌注20 μ L生理鹽水,其余各組每天陰道給藥1次,連續(xù)7 d。分別于治療 0、5、7及 12 d后用50 μ L PBS液灌洗陰道 8～ 10次 ,收集灌洗液于清潔無菌管中。

1.5 指標測定

陰道灌洗液搖勻后,進行10倍系列稀釋。照此方法稀釋成10-2及10-3的稀釋液。用20 μ L微量加樣器滴種于改良沙堡培養(yǎng)基平皿上,自高稀釋度滴種,每個稀釋度滴3滴。37℃培養(yǎng)48 h,計數(shù)菌落形成單位(CFU)。

計數(shù)培養(yǎng)基平面上生長的菌落數(shù)(CFU),選擇菌落中適中的稀釋度,計算出同一稀釋度平均菌落數(shù)X。CFU/mL標本=X×1/0.020×稀釋度×1/標本體積

2 結(jié) 果

各組小鼠在試驗過程中毛色光滑,進食正常,體重均有所增加。

2.1 陰道局部病變?nèi)庋塾^察

小鼠于接種白色念珠菌后,陰道充血,水腫,分泌物增加,嚴重者外陰紅腫,有白色凝乳狀陰道分泌物阻塞陰道口。給藥后,用藥各組陰道充血,水腫等病變比模型組明顯好轉(zhuǎn)。

2.2 菌落計數(shù)結(jié)果

用藥7 d后,A組、B組、C組、D組及 E組小鼠陰道灌洗液菌落計數(shù)分別為(6.13±0.25)、(5.96±0.13)、(5.55±0.24)、(5.17 ±0.0 8)、(5.04±0.10)。不同劑量的六神栓均能降低陰道灌洗液菌落計數(shù)均數(shù),與生理鹽水組比較有顯著性差異(P<0.05)。隨著六神栓治療劑量的增高,陰道灌洗液菌落計數(shù)逐漸下降,且差異有顯著性(P<0.05)。說明六神栓對小鼠白念珠菌陰道炎具有一定的治療作用。

3 討 論

雷氏六神丸是治療五官科炎性疾患的特效藥,具有清熱解毒、利咽散腫等作用,在臨床上廣泛應用于爛喉丹痧,喉風乳蛾,咽喉腫痛,咽下困難,癰疽瘡癤等癥。該方以牛黃、麝香為主藥,清熱解毒,消腫散結(jié),療熱毒郁結(jié)、咽喉腫痛腐爛及癰瘡疔毒;輔以冰片加強清熱、化腐之功,配以蟾酥加強解毒消腫之效,并有極強的止痛作用;佐以珍珠解毒化腐生肌,雄黃解毒。諸藥相合,共奏解毒、消炎、止癢之功效。

霉菌性陰道炎是由白色念珠菌所致,屬祖國醫(yī)學“陰癢”、“帶下”范疇。證屬濕熱型,治宜燥濕解毒、化瘀消腫、祛腐生肌。鑒于六神丸具有清熱解毒、消腫散結(jié)、化腐生肌等作用,我們將其劑型進行改革,擴大臨床治療范圍,制成鴨嘴型陰道栓劑(院內(nèi)制劑),用于治療婦科炎癥疾病,前期的臨床研究證實,六神栓對各型婦科炎癥,均有較好的治療效果。

如上所述,本課題組前期有關(guān)六神栓的研究,主要是臨床療效觀察的研究報道,按照中藥新藥開發(fā)的要求,在臨床觀察療效肯定的前提下,必須要進一步做在體動物實驗,按照國家中藥新藥的審批標準,進一步確證六神栓的各項指標,本課題進行了六神栓對小鼠白念珠菌陰道炎治療作用的實驗研究,結(jié)果表明,與生理鹽水組比較,各個劑量六神栓組的陰道灌洗液載菌量顯著減少(P<0.05),表明六神栓局部外用對小鼠白念珠菌陰道炎具有一定的治療作用。同時本實驗發(fā)現(xiàn)六神栓高劑量組比低劑量組更加顯著的減少了陰道灌洗液載菌量,說明低劑量局部外用治療小鼠白念珠菌陰道炎可能呈劑量相關(guān)性,高劑量的六神栓治療效更好。此外,實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)與各個劑量的六神栓比較,高劑量六神栓與保婦康栓的殺菌量無顯著性差異。這說明六神栓對白念珠菌陰道炎具有明顯的治療作用,與臨床報道相一致。

[1]NwokoLo N C,Boag F C.ChronicvaginaLcandidiasis[J].DrugsAging,2000,16(5):335.

[2]Garcia Heredia M,Garcia S D,Copolillo E F,et al.Prevalenceo fvagina lcandidia sisinpregnwomen:Identification of yeasts and susceptibility toantifungaL agents[J].Rev Argent Microbiol,2006,38(1):9.

[3]蘇佩清,康 連,宋 雪.六神栓治療霉菌性陰道炎臨床觀察[J].山東中醫(yī)雜志,2001,21(7):401.

[4]黃玉杯,葉正君,朱寒根.復方蛇床子栓的制備與試用[J].中成藥,1992,14(5):7.

[5]趙敬軍,沈永年,陳 偉,等.白念珠菌性陰道炎動物模型的構(gòu)建[J].中華皮膚科雜志,2002,35(5):346.