P-糖蛋白在戊四氮點燃小鼠大腦皮質內表達的研究

單萍,康慧聰,劉志廣,李巷,朱遂強

華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院神經科,武漢430030

研究者發現腫瘤細胞多藥抗藥性(multiple drug resistance,MDR)的形成與MDR1基因的過度表達有關。P-糖蛋白(P-glycoprotein,PGP)是MDR1基因表達的蛋白,通過能量依賴型的跨膜外排泵作用將進入細胞內的藥物重新泵出細胞,減少藥物在細胞內的蓄積,交叉抵抗若干結構和功能并不相關的親脂類藥物。研究發現難治性癲癇患者腦組織中存在MDR1高表達現象,推測癲癇耐藥性可能與PGP高表達有一定關系。頻繁的癲癇發作或癲癇持續狀態可增加腦內PGP、多藥耐藥相關蛋白(multidrug resistance protein,MRP)等多藥耐藥轉運蛋白的表達,很可能因此減少抗癲癇藥物在腦內的水平,與癲癇耐藥性的產生有關。本實驗觀察PGP在戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)致癲小鼠大腦皮質的表達情況及PGP表達與癲癇發作時程的關系,進一步探討其意義。

1 材料與方法

1.1 材料 ①動物：成年健康雄性C57BL/6小鼠64只,由華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供,體質量20～25 g。飼養于正常晝夜環境中,給予標準飼料及飲水。②主要試劑與材料：PTZ(購于 Sigma公司);Trizol、2 ×Taq PCR Master Mix(購于天根生化科技有限公司);逆轉錄試劑盒(購于TOYOBO公司);瓊脂糖(西班牙進口分裝);三氯甲烷(購于天津市東麗區天大化學試劑廠);異丙醇(購于國藥集團化學試劑有限公司);無水乙醇(購于上海振興化工廠);DEPC水(由華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院神經內科實驗室提供);Bio MarkerⅠ(購于BioFlux公司);引物設計及合成(由上海Invitrogen生物工程公司完成);Mdr1兔抗羊多克隆抗體、SABC-Cy3免疫組化……