遠志總皂苷對神經干細胞向神經元分化的影響＊

黃昕艷,王禹,張曉梅,趙錦程,朱曉峰

佳木斯大學神經科學研究所,黑龍江佳木斯154007

研究表明,中藥遠志的主要有效成分遠志總皂苷(tenuigenin)在抗衰老、益智、抗氧化等方面有廣泛的生物活性,對阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的作用已被許多實驗所證實[1]。但對于AD的主要病理改變,即大量的神經元及突觸的損傷與缺失[2],至今還缺乏明確有效的根治手段。神經干細胞(neural stem cells,NSCs)被公認為修復神經系統損傷的理想種子,但NSCs的臨床應用還存在著向功能神經元定向分化及克服局部致傷環境等很多難題[3]。遠志總皂苷對NSCs分化的影響目前尚未見報道。本研究旨在探討遠志總皂苷在體外誘導NSCs分化中的作用,為AD的傳統中藥的治療探索新的途徑。

1 材料與方法

1.1 材料 ①動物：新生SD大鼠(1～3 d),由佳木斯大學實驗動物中心提供。②主要試劑與材料：DMEM/F12干粉培養基、兔抗大鼠單克隆神經巢蛋白(Nestin)單克隆抗體、花青素 3(Cyanine 3,Cy3)標記的羊抗兔IgG、兔抗大鼠單克隆神經元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)單克隆抗體、B27、胎牛血清、SABC即用型試劑盒、DAB顯色試劑盒(購于Boster公司);堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、表皮生長因子(epiderinal grow th factor,EGF)(購于 Invitrogen公司);遠志總皂苷(由佳木斯大學化學與藥學院提取),經液相儀對比純度為75%,黃色粉末狀;遠志總皂苷母液配制：DMEM/F12培養基稀釋至1 mg/mL,4℃儲存。

1.2 方法

1.2.1 NSCs分離、培養及鑒定 取SD大鼠2只,75%乙醇體表消毒,移入超凈臺,斷頭,依次剪開頭皮、顱骨,去除大腦皮質,用眼科彎鑷于將海馬組織取出,剝去明顯血管,于D-hank's液中漂洗數次后,移入預先加入完全培養液(DMEM/F12培養……