西妥昔對脂多糖誘導的小膠質細胞活化和遷移的影響＊

渠文生,方軍,楊琴,詹燕,李在望,王偉#,田代實#

1.華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院神經科,武漢430030;2.襄樊市中心醫院神經內科,湖北襄樊441021;3.南京醫科大學附屬無錫市人民醫院神經內科,江蘇無錫214023

多發性硬化、老年性癡呆、脊髓損傷和腦血管病等多種神經系統疾病的發生發展過程均伴有炎癥反應[1-3]。小膠質細胞是神經系統主要的炎癥相關細胞,在各種損傷刺激下,可以快速反應,如活化、遷移、吞噬、抗原提呈及大量因子釋放等[4]。過度的炎癥反應是繼發性損傷的重要原因之一,抑制小膠質細胞的過度活化有利于損傷修復[5]。本研究觀察表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)的特異性單克隆抗體西妥昔(Cetuximab)對原代培養的小膠質細胞活化和遷移的影響,探討西妥昔在神經系統損傷治療中的價值。

1 材料與方法

1.1 材料 ①動物：新生Wistar大鼠(＜3 d),由華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供。②主要試劑與材料：胎牛血清、DMEM/F12培養基、高糖 DMEM/F12培養基(購于 Hyclone公司);25 cm2塑料培養瓶、12孔及24孔塑料培養板(購于Corning公司);胰蛋白酶、多聚賴氨酸、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、Triton(購于碧云天生物技術研究所);細菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(購于 Sigma-aldrich公司);西妥昔(購于Merck公司);小鼠抗大鼠CD11b單克隆抗體(購于Biosciences公司);兔抗小鼠磷酸化EGFR單克隆抗體(購于Cell signal公司);異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)標記的羊抗鼠IgG、花青素3(Cyanine 3,Cy3)標記的羊抗兔IgG(購于 Jackson ImmunoResearch公司);Transwell小室(8 μ m 孔,12孔板裝載)(購于Corning公司);激光共聚焦熒光顯微鏡、倒置顯微鏡(購于Olympus公司);CO2細胞培養箱(購于Thermo公司)。

1.2 方法

1.2.1 小膠質細胞原代培養及純化 取4只新生大鼠,無菌條件下剪開脊髓背部皮膚,撥開脊柱棘突,游離胸腰段脊髓,取出后放入冰PBS液中反復沖洗以去除血污?！?br>