分光光度法定量分析尿液中百草枯

朱海霞 陳禮明 陳姿如

百草枯又名克無蹤、對草快，屬高效有機雜環類接觸性除草劑與脫葉劑。目前臨床上多采用血液定量、尿液定性的方法檢測百草枯，尿液定量檢測百草枯方法少見報道[1]。本文介紹一種快速、簡便的百草枯尿液定量檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 722分光光度計（山東魯南瑞虹化工儀器有限公司），離心機；無水碳酸鈉、碳酸氫鈉、連二亞硫酸鈉（保險粉）均為分析純，20%三氯醋酸。

1.2 標準曲線的繪制 以市售百草枯（20%，即200 g/L）為標準，用去離子蒸餾水稀釋為40 mg/L百草枯標準貯備液。取貯備液0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0 mL分別于8只玻璃試管中，加蒸餾水2.5 mL和正常尿液2.5 mL混勻，百草枯質量濃度分別為0、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2、4.0和8.0 mg/L，加固體無水碳酸鈉0.5 g和碳酸氫鈉0.2 g，混合使其溶解，使其pH>9.0，加固體連二亞硫酸鈉0.3 g混合溶解呈藍色，722分光光度計比色，波長396 nm，1 cm比色杯，以水為參比測定吸光度，平行操作3次取均值，以測定管吸光度減去空白管吸光度為Y值，百草枯濃度為X值求得標準曲線及回歸方程。

1.3 樣品測定 取2只10 mL玻璃試管分別稱為V和B管，各加患者尿液2.5 mL，蒸餾水2.5 mL，加固體無水碳酸鈉0.5 g和碳酸氫鈉0.2 g，混合使其溶解，pH>9.0，V管加固體連二亞硫酸鈉0.3 g混合溶解顯藍色。以水為參比，用722分光光度計分別對2管進行比色，波長396 nm，所得尿液空白吸光度視為AB,尿液測定管吸光度視為AV，（AV-AB）通過回歸方程或查標準曲線得到的值乘以2即尿百草枯濃度。

2 結果

（1）線性關系和檢出限。百草枯濃度在0～5.0 mg/L線性關系良好，r=0.999 2，回歸方程Y=0.182 3 X+0.002 7，方法檢出限為0.10 mg/L，尿樣最低檢出濃度為0.10 mg/L。（2）方法的精密度。用健康查體者混合尿液配制0.5、2.0、10.0 mg/L低、中、高百草枯樣品，分別進行6次重復試驗，計算方法的精密度，其相對標準差（RSD）分別為5.0%、4.2%和4.8%。（3）方法的回收率試驗。用正常人尿液配制0.5、5.0和10.0 mg/L共3種百草枯樣品濃度，分別進行6次重復試驗，計算方法的回收率為95.5%～102.3%。其RSD分別為4.6%、3.2%和4.7%。（4）尿樣本底顏色的干擾。尿樣顏色呈淺黃色、褐色，深淺差別較大，在396 nm有較大的吸光度，百草枯中毒后的患者因尿液膽紅素增高，尿液更易變黃。（5）顯色穩定性。加入顯色劑連二亞硫酸鈉后，其藍色會隨著時間的延長而褪色。

3 討論

采用722分光光度計比色法檢測尿液中的百草枯對診斷和治療百草枯中毒有重要意義，百草枯主要以原形從腎小球和腎小管濾過排泄。尿液中百草枯的量相對較高，有時當血樣中已檢測不到時，尿液中仍能檢測到，所以檢測尿液中百草枯可作為是否需要血液灌流或透析的重要指標；筆者將用到的固體試劑無水碳酸鈉、碳酸氫鈉及連二亞硫酸鈉稱量包裝于帶蓋的塑料樣品杯中，方便使用，若配制成液體試劑，則不呈藍色反應；本法不需要昂貴器材設備，簡便快速，靈敏度高，一般接到樣品后10 min即可發出報告；線性試驗、精密度試驗和回收試驗結果也顯示該方法能夠滿足臨床需要。

[1]孫世義,王翠,羅曉芳.分光光度法快速測定尿中百草枯[J].中國衛生檢驗雜志,2008,18（5）:819-874.